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细胞相关> 细胞标记与染色> 荧光染色
产品编号: C2263M
产品包装:200-2000次
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价格: ¥ 823.64
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C2263S 细胞示踪蓝色荧光染色试剂盒(Cell-Tracker™ Blue CMAC) 50-500次 239.00元
C2263M 细胞示踪蓝色荧光染色试剂盒(Cell-Tracker™ Blue CMAC) 200-2000次 698.00元

碧云天的细胞示踪蓝色荧光染色试剂盒(Cell-Tracker™ Blue CMAC),即Cell Tracking Blue Fluorescence Staining Kit with Cell-Tracker™ Blue CMAC,是一种以Cell-Tracker™ Blue CMAC (也称CellTracker Blue CMAC或Blue CMAC)为蓝色荧光探针用于活细胞荧光示踪的试剂盒。本试剂盒可使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪等荧光检测系统进行检测。本试剂盒兼容后续的细胞固定和通透,也适用于死细胞或固定后细胞的染色。

Cell-Tracker™ Blue CMAC全称为7-氨基-4-氯甲基香豆素(7-Amino-4-chloromethylcoumarin),是氨基香豆素的氯甲基衍生物,分子式为C10H8ClNO2,分子量为209.63,CAS number为147963-22-2。作为一种细胞膜通透性荧光探针,Cell-Tracker™ Blue CMAC能穿透细胞膜进入活细胞,并被胞内酯酶水解,释放出具有反应活性的氯甲基基团,同时产生微弱荧光。该活性基团随后与细胞内富含的还原型谷胱甘肽(Glutathione, GSH)中的巯基(-SH)发生不可逆共价结合,形成具有强蓝色荧光的CMAC-GSH加合物。该探针具有以下特性:激发后发出明亮的蓝色荧光,最大激发波长约为353nm,最大发射波长约为466nm;可通过氯甲基与细胞内的GSH在谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferase, GST)作用下生成不可逆的荧光产物,能完好地保留在胞内,实现长期标记;荧光信号在生理pH值下非常稳定,至少可维持48小时,非常适用于细胞运动、定位、增殖、迁移、趋化和侵袭等示踪研究[1];在细胞群内,染料只会转移到子代细胞,不会转移到邻近细胞;无毒,不影响细胞活力或增殖。

本试剂盒对HeLa细胞的荧光显微镜和流式细胞仪检测效果请参考图1。

图1.碧云天细胞示踪蓝色荧光染色试剂盒(Cell-Tracker™ Blue CMAC) (C2263)染色HeLa细胞(人宫颈癌细胞)的染色效果图。在本试剂盒标记HeLa细胞后的第0-2天分别在荧光显微镜下观察细胞染色情况(图A)并传代,同时使用流式细胞仪检测(图B)。检测结果显示,Cell-Tracker™ Blue CMAC (简称CMAC)标记的HeLa细胞呈现明亮的蓝色荧光,随着传代次数的增加荧光强度逐渐减弱,不同分裂次数的细胞峰区分明显。图B中流式细胞仪检测通道为PB450 (Ex/Em=405/450)。本实验所用染色工作液中Cell-Tracker™ Blue CMAC的浓度为2.5X。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,本图仅供参考。

对于96孔板中的样品,按照每孔使用100μl染色液计算,本试剂盒的小包装和中包装可以进行500次和2000次检测;如果用于流式细胞仪检测,按照每个样品的检测体系体积为0.5ml时,本试剂盒的小包装和中包装可以进行100次和400次检测;对于6孔板中的贴壁培养细胞样品,按照每孔使用1ml染色液计算,本试剂盒的小包装和中包装可以进行50次和200次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C2263S-1 Cell-Tracker™ Blue CMAC (1000X) 50µl
C2263S-2 Staining Enhancer (100X) 500μl
C2263S-3 Assay Buffer 50ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
C2263M-1 Cell-Tracker™ Blue CMAC (1000X) 200µl
C2263M-2 Staining Enhancer (100X) 2ml
C2263M-3 Assay Buffer 200ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,一年有效。其中Cell-Tracker™ Blue CMAC (1000X)须避光保存。

注意事项:

Cell-Tracker™ Blue CMAC (1000X)反复冻融对于其检测效果有影响,首次使用时请适当分装,避免反复冻融。

对于微量的液体,每次使用前请先离心数秒钟,使液体充分沉降到管底。

荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

Cell-Tracker™ Blue CMAC用于长期细胞示踪实验时最多可维持48小时,如需更长的示踪时间,推荐使用细胞示踪绿色荧光染色试剂盒(Cell-Tracker™ Green CMFDA) (C2233)或细胞示踪红色荧光染色试剂盒(Cell-Tracker™ Red CMTPX) (C2268),可示踪3-5天。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.染色工作液的配制。
对于6、12、24、96孔板,每孔所需的染色工作液(Working Solution)的用量分别为1ml、500μl、200μl和50-100μl。根据样品数量,计算所需检测工作液的体积。以12孔板每孔500μl染色工作液的体系为例,参考下表配制检测工作液。
Samples 1 5 10 20
Cell-Tracker™ Blue CMAC (1000X) 0.5μl 2.5μl 5μl 10μl
Staining Enhancer (100X) 5μl 25μl 50μl 100μl
Assay Buffer 494.5μl 2.473ml 4.945ml 9.89ml
Working Solution 500μl 2.5ml 5ml 10ml
注1:Blue CMAC染色工作液需现用现配,并一次性使用完毕,不可冻存。
注2:Blue CMAC染色工作液中的Cell-Tracker™ Blue CMAC的最终浓度需根据不同细胞系和实验体系通过预实验进行优化,上表中的用量为推荐用量,可以在1X-5X范围内摸索最佳工作浓度,特别是用于细胞长期示踪实验时,为获得理想的检测效果,Cell-Tracker™ Blue CMAC的工作浓度须随着实验天数的增加而适当加大。
注3:本试剂盒中提供的Assay Buffer在一段时间内可以维持细胞的正常状态,并给细胞提供一定的营养,效果通常比PBS或HBSS更好,也可以使用Assay Buffer外的其它合适的缓冲液,如含血清完全培养液、无血清培养液、HBSS (C0218)或PBS (C0221A)。
2.荧光显微镜检测。
a.接种培养。将细胞接种于96孔板等多孔板或细胞培养皿中,按照实验设计对细胞进行适当处理。
b.洗涤(选做)。对于贴壁细胞,吸除培养液,用PBS洗涤细胞1次;对于悬浮细胞,250-1000×g室温离心5分钟,吸除上清,用PBS洗涤1次。吸除培养液和PBS时最好使用真空泵。在能充分吸净残留液体的情况下,可以不使用PBS洗涤。
c.染色。加入适当体积的Blue CMAC染色工作液。通常96孔板每孔加入100μl,24孔板每孔加入250μ1,12孔板每孔加入500μl,6孔板每孔加入1ml。37ºC避光孵育30分钟。孵育时间可在20-45分钟之间进行调整。
注1:如果是首次实验不能确定孵育时间,建议先尝试37ºC孵育30分钟,观察荧光效果。如果正常细胞染色过强,则适当缩短时间;如果荧光强度太弱,则适当延长时间。
注2:孵育后也可用PBS或HBSS洗涤1-3次。
注3:如果进行长期细胞示踪实验,细胞染色后,可根据实验设计每隔一定时间镜下观察拍照后进行细胞传代即可,期间无需再次染色,本试剂盒用于长期细胞示踪实验最多可维持48小时,建议用于分析第一代或早期代数细胞。
d.检测。孵育结束后,即可在荧光显微镜下观察染色效果(Cell-Tracker™ Blue CMAC为蓝色荧光,Ex/Em=353/466nm)。
3.流式细胞仪检测。
a.接种培养。将细胞接种于6孔板或适当的细胞培养器皿中,按实验设计对细胞进行适当处理。
b.细胞准备。贴壁细胞胰酶消化后用培养液重悬,并用PBS洗涤1次;悬浮细胞250-1000×g室温离心5分钟,吸除上清,用PBS洗涤1次。每个样品推荐的细胞用量为50-100万个细胞。
c.染色。对于上一步骤的50-100万个细胞的沉淀,加入0.5ml Blue CMAC染色工作液,重悬为单细胞悬液。37ºC避光孵育30分钟。孵育时间可在20-45分钟之间进行调整。
注1:如果是首次实验不能确定孵育时间,建议先尝试37ºC孵育30分钟,观察荧光效果。如果正常细胞染色过强,则适当缩短时间;如果荧光强度太弱,则适当延长时间。
注2:孵育后也可用PBS或HBSS洗涤1-3次。
注3:如果进行长期细胞示踪实验,细胞染色后,可根据实验设计每隔一定时间使用流式细胞仪检测后进行细胞传代即可,期间无需再次染色,本试剂盒用于长期细胞示踪实验最多可维持48小时,建议用于分析第一代或早期代数细胞。
d.检测。孵育完成后,可以直接进行流式细胞仪检测,也可以250-1000×g室温离心5分钟沉淀细胞,吸净液体后每个样品加入0.5ml Assay Buffer重悬细胞后用流式细胞仪检测(Cell-Tracker™ Blue CMAC为蓝色荧光,Ex/Em=353/466nm,推荐用PB450 (Ex/Em=405/450)通道进行检测)。
注1:由于流式细胞仪比较灵敏,使用的荧光探针浓度可能要比荧光显微镜检测时要低,此时可根据细胞类型和染色效果对Cell-Tracker™ Blue CMAC稀释倍数进行适当调整。
注2:如果进行长期细胞示踪实验,可使用适量细胞培养液重悬细胞,取0.5ml用于流式细胞仪检测,剩余重悬液可根据实验需求接种于细胞培养器皿中继续培养。
参考文献:
1.Maruyama J, Nakajima H, Kitamoto K. FEMS Microbiol Lett. 2002. 206(1):57-61.
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