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细胞相关> 细胞组织染色> 荧光染色
Lyso-Tracker Green (溶酶体绿色荧光探针)
产品编号: C1047S
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价格:¥379.00元
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C1047S Lyso-Tracker Green (溶酶体绿色荧光探针) 50μl 379.00元

Lyso-Tracker Green是一种溶酶体(lysosome)绿色荧光探针,能通透细胞膜,可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染色。

Lyso-Tracker Green为采用Molecular Probes公司的DND-26进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针,其中仅弱碱可部分提供质子,以维持pH在中性,可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中,从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色,但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。Lyso-Tracker Green适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。

Lyso-Tracker Green的分子式为C18H26BClF2N4O,分子量为398.7,其最大激发光波长为504nm,最大发射光波长为511nm。Lyso-Tracker Green的化学结构式和激发、发射光谱图参考图1。


图1. Lyso-Tracker Green的化学结构式(A)和激发、发射光谱图(B)。

Lyso-Tracker Green是嗜酸性荧光探针,用于活细胞内酸性细胞器的标记和示踪。这些探针具有几个重要特征,包括高度选择靶向酸性细胞器和在纳摩尔浓度有效标记活细胞。Lyso-Tracker Green必须在极低浓度(通常约50nM)下才能获得优异的选择性。这些探针的滞留(retention)机制虽然没有被研究清楚,但很可能与酸性细胞器的质子化和滞留性有关,Lyso-Tracker Green探针的内吞作用动力学研究显示染料进入活细胞的摄入时间仅几秒即可。然而,这些溶酶体探针会导致溶酶体被碱化,长期孵育会诱使溶酶体pH值的增加。因此,建议成像前用探针孵育细胞的时间不能太久。Lyso-Tracker Green探针具体使用浓度和孵育时间需要根据自身实验条件和具体细胞种类来进行摸索以达到满意的染色效果。Lyso-Tracker Green染色活细胞溶酶体的效果请参考图2。


图2. Lyso-Tracker Green染色NRK-52E细胞(大鼠肾小管上皮细胞)的效果图。Hoechst 33342染色的NRK-52E细胞其细胞核呈现蓝色荧光;Lyso-Tracker Green染色的NRK-52E细胞其溶酶体呈现绿色荧光。

按照1:20,000的比例稀释,可以配制1000ml Lyso-Tracker Green工作液。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C1047S Lyso-Tracker Green (1mM) 50µl
说明书 1份
保存条件:

-20℃避光保存,半年有效。

注意事项:

Lyso-Tracker Green (1mM)在4℃冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。对于微量的液体,每次使用前先离心数秒钟,使液体充分沉降到管底。

荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

Lyso-Tracker Green适用于活细胞染色,但不适合用于固定后细胞的染色。如果经Lyso-Tracker Green染色后的细胞需要进行固定操作,可以尝试3%的戊二醛(glutaraldehyde)。

需自备盖玻片载玻片(可以向碧云天订购)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.Lyso-Tracker Green工作液的配制:
a.取少量Lyso-Tracker Green按照1:13,333-1:20,000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中,使最终浓度为50-75nM。例如取1µl Lyso-Tracker Green加入到20ml或13.33ml细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中。混匀后即为Lyso-Tracker Green工作液。HBSS with Ca2+ & Mg2+ (C0219)可以向碧云天订购。
b.Lyso-Tracker Green工作液使用前需37℃预温育。注:工作液中Lyso-Tracker Green的浓度可以根据实际情况进行适当调整。为降低背景,在染色效果可以接受的范围内,建议尽量使用较低浓度的Lyso-Tracker Green。
2.溶酶体的荧光标记:
a.去除细胞培养液,加入步骤1配制好的并37℃预温育的Lyso-Tracker Green染色工作液,与细胞37℃共孵育5-60分钟。
b.去除Lyso-Tracker Green染色工作液,加入新鲜的细胞培养液。
c.随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到溶酶体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳,可以提高Lyso-Tracker Green染色工作液中Lyso-Tracker Green的浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。Lyso-Tracker Green染色活细胞溶酶体的效果请参考图2。
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