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细胞相关> 细胞组织染色> 荧光染色
微管绿色荧光染色试剂盒(活细胞染色用)
产品编号: C2213S
产品包装:20-200次
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价格:¥689.00元
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C2213S 微管绿色荧光染色试剂盒(活细胞染色用) 20-200次 689.00元

碧云天生产的微管绿色荧光染色试剂盒(活性染色用),Tubulin-Tracker Green Staining Kit for Living Cells,是一种使用了便捷灵敏的荧光探针Oregon Green 488 Taxol bis-acetate的活细胞微管绿色荧光染色试剂盒。本试剂盒除了荧光探针还提供了促溶剂、染色增强剂和稀释液,使荧光染色检测非常便捷。

Tubulin-Tracker Green探针是一种不带电荷的无荧光化合物,可轻松穿透活细胞的细胞膜。一旦进入细胞内,其亲脂性基团被细胞内的酯酶切除,就会变成带电荷的荧光形式,可以产生绿色荧光。

Tubulin-Tracker Green在活细胞内扩散快、灵敏度高、能够对细胞微管均匀染色,可使用荧光显微镜进行观察和检测。

Taxol, 即paclitaxel,中文名紫杉醇,是一类能够结合于微管的细胞骨架药物,具有一定的细胞毒性,可以抑制细胞的有丝分裂,该作用与其结合细胞内微管蛋白有关。Taxol可与聚合微管蛋白(polymerized tubulin)结合,结合后可促进微管聚合并稳定已聚合的微管,并将细胞周期阻滞于G2期和M期。所以需注意使用Tubulin-Tracker Green探针会抑制有丝分裂的进行,并可能影响依赖于聚合微管蛋白的其它功能。

本试剂盒中的Tubulin-Tracker Green是Oregon Green® 488 Taxol (CAS号301844-13-3)的一种双乙酸酯修饰形式,更易进入细胞,荧光标记更均一,特异性也更好。

Tubulin-Tracker Green分子式为C75H69F2N2O23,分子量约为1404,最大激发光波长为496nm,最大发射光波长为526nm。Tubulin-Tracker Green的化学结构式和光谱图参考图1。

图1. Tubulin-Tracker Green的化学结构式(图A)及激发、发射光谱图(图B)。

Tubulin-Tracker Green只适用于对活细胞进行微管的荧光标记,不能对死细胞进行标记。使用本产品标记活细胞内微管的效果参考图2。

图2. Tubulin-Tracker Green (微管绿色荧光探针)对于NRK-52E细胞(大鼠肾小管上皮细胞)的染色效果。Tubulin-Tracker Green染色的NRK-52E细胞其微管呈现绿色荧光(图B),Mito-Tracker Red CMXRos (C1049)染色的NRK-52E细胞其线粒体呈现红色荧光(图C),绿色荧光、红色荧光及细胞核蓝色荧光的叠加(merge)效果见图D。其中细胞核使用Hoechst 33342 (C1027)染色。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

本产品中提供的促溶剂可以促进Tubulin-Tracker Green探针的溶解并改善染色效果;提供的染色增强剂(100X)是定位于活细胞膜上的阴离子转运蛋白的抑制剂,可降低去酯化的Tubulin-Tracker Green探针通过主动运输分泌到胞外;提供的Tubulin-Tracker Green稀释液使活细胞的微管荧光染色和洗涤更加便捷。

对于96孔板或6孔板,按照1:1000配制Tubulin-Tracker Green染色工作液,且每孔使用100μl或1ml Tubulin-Tracker Green染色工作液,本试剂盒分别可以进行200次或20次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C2213S-1 Tubulin-Tracker Green (1000X) 20µl
C2213S-2 促溶剂 20µl
C2213S-3 染色增强剂(100X) 800µl
C2213S-4 Tubulin-Tracker Green稀释液 80ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少半年有效,-80℃保存,至少一年有效。促溶剂和Tubulin-Tracker Green稀释液可以4℃保存。Tubulin-Tracker Green (1000X)需避光保存。

注意事项:

荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

细胞在含染色增强剂(1X)的溶液中孵育的时间不能超过2小时。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.Tubulin-Tracker Green (500X)中间贮存液的准备:
融解并取出适当体积的Tubulin-Tracker Green (1000X),加入等体积的促溶剂,即为Tubulin-Tracker Green (500X)中间贮存液。Tubulin-Tracker Green (500X)中间贮存液密封避光保存于-20℃两周内有效。
2.Tubulin-Tracker Green染色工作液的配制:对于6、12、24、96孔板,每孔所需的Tubulin-Tracker Green染色工作液的用量分别为1~2ml、0.5~1ml、200~500μl和100μl。根据样品数量,计算所需Tubulin-Tracker Green染色工作液的体积。以12孔板每孔1ml染色工作液的体系为例,参考下表配制Tubulin-Tracker Green染色工作液。
样品数 1 5 10 20
Tubulin-Tracker Green (500X) 2μl 10μl 20μl 40μl
染色增强剂(100X) 10μl 50μl 100μl 200μl
Tubulin-Tracker Green稀释液 988μl 4.94ml 9.88ml 19.76ml
染色工作液总体积 1ml 5ml 10ml 20ml

注1:Tubulin-Tracker Green染色工作液使用前需37℃预温育。
注2:Tubulin-Tracker Green染色工作液中的Tubulin-Tracker Green的最终浓度需根据不同细胞系和实验体系通过预实验进行优化。Tubulin-Tracker Green的推荐工作浓度为1X,可以在0.5X-2X范围内摸索最佳工作浓度。为降低背景,在染色效果可以接受的范围内,建议尽量使用较低浓度的Tubulin-Tracker Green。
注3:本试剂盒中提供的Tubulin-Tracker Green稀释液在一段时间内可以维持细胞的正常状态,并给细胞提供一定的营养,效果通常比PBS或HBSS更好,也可以用其它合适的溶液,如无血清培养液代替。
3.活细胞微管的荧光标记:
a.去除细胞培养液,用适量的溶液如HBSS (C0218/C0219)或PBS (C0221A)洗涤生长在孔板、培养皿或爬片上的细胞。注:对于悬浮细胞的染色可以参考贴壁细胞的染色方法进行。
b.去除洗涤液,加入步骤2配制好的并37℃预温育的Tubulin-Tracker Green染色工作液,与细胞37℃共孵育30-120分钟,不同的细胞最佳孵育时间有所不同。以30分钟作为初始孵育时间,根据所用细胞对孵育时间进行适当优化以得到最佳效果。
c.去除Tubulin-Tracker Green染色工作液,用含染色增强剂 (1X)的Tubulin-Tracker Green稀释液洗涤细胞2-3次。
d.用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察(Tubulin-Tracker Green为绿色荧光,Ex/Em = 496/526nm,设置与FITC或GFP相同),此时可观察到微管呈清晰的绿色荧光染色。注:染色完毕后应立即观察,放置时间过长会导致荧光强度减弱。
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