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报告基因质粒

pGL6-miR (报告基因质粒)
产品编号: D2106-1μg
产品包装: 1μg
产品价格: 888.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2106-1μg pGL6-miR (报告基因质粒) 1μg 888.00元

      pGL6-miR (报告基因质粒)是碧云天自行研发的一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点,然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3'-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。
      萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
      pGL6-miR以碧云天的pGL6质粒为模板,具有氨苄青霉素抗性,并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点,便于插入目的基因的3'-UTR或其它适当的靶序列。
      pGL6-miR的主要工作原理是,把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游,转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合,通常会抑制萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解,从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平,可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变,用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后,miRNA的调控作用消失,则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。
      pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子,有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用,即当miRNA的抑制作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。
      pGL6-miR质粒的主要信息如下:

Base pairs 6097bp
Feature Nucleotide Position
PGK promoter 20-538
luc2 reporter gene 549-2202
Multiple cloning region 2208-2261
SV40 late poly(A) sinal 2268-2512
SV40 early enhancer/promoter 2554-2972
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region 2998-3792
Synthetic poly(A) signal 3817-3865
Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region 4980-5840
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site 5945-6097

      pGL6-miR质粒图谱如下:

      pGL6-miR质粒的多克隆位点的详细图谱如下(请特别注意其中的NheI不是单酶切位点):

KpnI NheI
2169 AGGCCAAGAA GGGCGGCAAG ATCGCCGTGT
AAAGATCC GG
TACCGCTAGC
TCCGGTTCTT CCCGCCGTTC TAGCGGCACA
TTTCTAGG CC
ATGGCGATCG
BamHI EcoRV XhoI SacI MluI BglII HindIII
2220 GGATCCGATA TCCTCGAGGA GCTCACGCGT AGATCTAAGC
TT CGATCTCG
CCTAGGCTAT AGGAGCTCCT CGAGTGCGCA TCTAGATTCG
AA GCTAGAGC

      pGL6-miR中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGL6-miR)包括:

Aat II Afl II Asc I Ase I Bsa I BsaA I BsiW I
BssH II Eco72 I EcoR I Nde I Nru I PflM I Pme I
Pml I Psp1406 I PspA I Rsr II Sam I SnaB I Spl I
Srf I Tth111 I Vsp I Xcm I

      pGL6-miR中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGL6-miR once)包括:

Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 9 Sal I G`TCGA,C 3881
BspM II T`CCGG,A 445 EcoN I CCTNN`N,NNAGG 3472
BsaB I GATNN|NNATC 997 Xba I T`CTAG,A 3796
BsrG I T`GTAC,A 1040 BsiC I TT`CG,AA 3867
Dra III CAC,NNN`GTG 1696 BstB I TT`CG,AA 3867
Acc65 I G`GTAC,C 2209 ApaL I G`TGCA,C 4445
Asp718 G`GTAC,C 2209 Ple I GAGTC 9/10 4510
Kpn I G,GTAC`C 2213 HgiE II ACCNNNNNNGGT -1/13 4710
BamH I G`GATC,C 2221 Not I GC`GGCC,GC 4951
EcoR V GAT|ATC 2229 BstX I CCAN,NNNN`NTGG 4975
PaeR7 I C`TCGA,G 2233 Pst I C,TGCA`G 4975
Xho I C`TCGA,G 2233 BstE II G`GTNAC,C 4978
Sac I G,AGCT`C 243 Ahd I GACNN,N`NNGTC 5053
Mlu I A`CGCG,T 2245 Bsu36 I CC`TNA,GG 5409
Bgl II A`GATC,T 2251 Pvu I CG,AT`CG 5423
HinD III A`AGCT,T 2257 Sac II CC,GC`GG 5447
Apo I R`AATT,Y 2361 Bst1107 I GTA|TAC 5563
Mun I C`AATT,G 2425 Xca I GTA|TAC 5563

      pGL6-miR质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
      Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
      pGL6-miR的全序列信息:D2106 pGL6-miR-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2106-1μg pGL6-miR (报告基因质粒) 1μg
D2106-100μg pGL6-miR (报告基因质粒) 100μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽
提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. 插入靶序列:在pGL6-miR多克隆位点选取适当的酶切位点,经酶切处理后连入目的基因的3'-UTR或
其它适当的靶序列。
4. 以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用碧云天的萤火虫萤
光素酶报告基因检测试剂盒(RG016/RG017)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
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Toxicol Lett. 2018 Mar 1;284:195-204.