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报告基因质粒

pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)
产品编号: D2480-1μg
产品包装: 1μg
产品价格: 888.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2480-1μg pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒) 1μg 888.00元

      pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于检测TNF-α promoter转录活性水平的报告基因质粒。
      pTNF-α-promoter-luc是以碧云天的pGL6质粒为模板,在其多克隆位点插入了human TNF-α的启动子序列(-991bp~+1bp),可以高灵敏度地检测human TNF-α promoter的激活水平。
      TNF-α(Tumor Necrosis Factor α),中文名为肿瘤坏死因子α,是一种非常重要的炎性细胞因子,在炎性疾病的发生发展过程中起重要作用,常作为炎症反应的重要指标。
      pGL6质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了全面的改进,一方面对于luciferase的编码进行了改进,确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达,同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。
      萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
      pTNF-α-promoter-luc质粒的主要信息如下:

Base pairs 6555
hTNF-α promoter 20-1010
luc2 reporter gene 1056-2708
SV40 late poly(A)signal 2743-2964
SV40 early enhancer/promoter 3012-3430
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region 3455-4249
Synthetic poly(A)signal 4274-4322
Reporter Vector primer 4(RVprimer4)binding region 4389-4408
ColE1-derived plasmid replication origin 4646
Synthetic Beta-lactamase(Ampr)coding region 5437-6297
Synthetic poly(A)signal/transcriptional pause site 6402-6555
Reporter Vector primer 3(RVprimer3)binding region 6504-6523

      pTNF-α-promoter-luc质粒的图谱如下:

      pTNF-α-promoter-luc的多克隆位点及TNF-α promoter的详细图谱如下:

BglI KpnI TNF-α promoter
1 GGCCTAACTG
GCCGGTACC A
GCTCCTGGGA GATATGGCCA CATGTAGCGG
CCGGATTGAC
CGGCCATGG T
CGAGGACCCT CTATACCGGT GTACATCGCC
51 CTCTGAGGAA TGGGTTACAG GAGACCTCTG GGGAGATGTG ACCACAGCAA
GAGACTCCTT ACCCAATGTC CTCTGGAGAC CCCTCTACAC TGGTGTCGTT
101 TGGGTAGGAG AATGTCCAGG GCTATGGAAG TCGAGTATGG GGACCCCCCC
ACCCATCCTC TTACAGGTCC CGATACCTTC AGCTCATACC CCTGGGGGGG
151 TTAACGAAGA CAGGGCCATG TAGAGGGCCC CAGGGAGTGA AAGAGCCTCC
AATTGCTTCT GTCCCGGTAC ATCTCCCGGG GTCCCTCACT TTCTCGGAGG
201 AGGACCTCCA GGTATGGAAT ACAGGGGACG TTTAAGAAGA TATGGCCACA
TCCTGGAGGT CCATACCTTA TGTCCCCTGC AAATTCTTCT ATACCGGTGT
251 CACTGGGGCC CTGAGAAGTG AGAGCTTCAT GAAAAAAATC AGGGACCCCA
GTGACCCCGG GACTCTTCAC TCTCGAAGTA CTTTTTTTAG TCCCTGGGGT
301 GAGTTCCTTG GAAGCCAAGA CTGAAACCAG CATTATGAGT CTCCGGGTCA
CTCAAGGAAC CTTCGGTTCT GACTTTGGTC GTAATACTCA GAGGCCCAGT
EcoRI XmaI/SmaI
351 GAATGAAAGA AGAAGGCCTG CCCCAGTGGG GTCTGTGAAT TCCCGGGGGT
CTTACTTTCT TCTTCCGGAC GGGGTCACCC CAGACACTTA AGGGCCCCCA
XmaI/SmaI
401 GATTTCACTC CCCGGGGCTG TCCCAGGCTT GTCCCTGCTA CCCCCACCCA
CTAAAGTGAG GGGCCCCGAC AGGGTCCGAA CAGGGACGAT GGGGGTGGGT
451 GCCTTTCCTG AGGCCTCAAG CCTGCCACCA AGCCCCCAGC TCCTTCTCCC
CGGAAAGGAC TCCGGAGTTC GGACGGTGGT TCGGGGGTCG AGGAAGAGGG
501 CGCAGGGACC CAAACACAGG CCTCAGGACT CAACACAGCT TTTCCCTCCA
GCGTCCCTGG GTTTGTGTCC GGAGTCCTGA GTTGTGTCGA AAAGGGAGGT
551 ACCCCGTTTT CTCTCCCTCA AGGACTCAGC TTTCTGAAGC CCCTCCCAGT
TGGGGCAAAA GAGAGGGAGT TCCTGAGTCG AAAGACTTCG GGGAGGGTCA
601 TCTAGTTCTA TCTTTTTCCT GCATCCTGTC TGGAAGTTAG AAGGAAACAG
AGATCAAGAT AGAAAAAGGA CGTAGGACAG ACCTTCAATC TTCCTTTGTC
651 GCCACAGACC TGGTCCCCAA AAGAAATGGA GGCAATAGGT TTTGAGGGGC
CGGTGTCTGG ACCAGGGGTT TTCTTTACCT CCGTTATCCA AAACTCCCCG
701 ATGGGGACGG GGTTCAGCCT CCAGGGTCCT ACACACAAAT CAGTCAGTGG
TACCCCTGCC CCAAGTCGGA GGTCCCAGGA TGTGTGTTTA GTCAGTCACC
751 CCCAGAAGAC CCCCCTCGGA ATCGGAGCAG GGAGGATGGG GAGTGTGAGG
GGGTCTTCTG GGGGGAGCCT TAGCCTCGTC CCTCCTACCC CTCACACTCC
801 GGTATCCTTG ATGCTTGTGT GTCCCCAACT TTCCAAATCC CCGCCCCCGC
CCATAGGAAC TACGAACACA CAGGGGTTGA AAGGTTTAGG GGCGGGGGCG
851 GATGGAGAAG AAACCGAGAC AGAAGGTGCA GGGCCCACTA CCGCTTCCTC
CTACCTCTTC TTTGGCTCTG TCTTCCACGT CCCGGGTGAT GGCGAAGGAG
SacI
901 CAGATGAGCT CATGGGTTTC TCCACCAAGG AAGTTTTCCG CTGGTTGAAT
GTCTACTCGA GTACCCAAAG AGGTGGTTCC TTCAAAAGGC GACCAACTTA
951 GATTCTTTCC CCGCCCTCCT CTCGCCCCAG GGACATATAA AGGCAGTTGT
CTAAGAAAGG GGCGGGAGGA GAGCGGGGTC CCTGTATATT TCCGTCAACA
PstI
-1BglIIHindIII
1001
TGGCACACCC
AGATCTGCAG AAGCTTGGCA ATCCGGTACT GTTGGTAAAG
ACCGTGTGGG
TCTAGACGTC TTCGAACCGT TAGGCCATGA CAACCATTTC

      pTNF-α-promoter-luc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pTNF-α-promoter-luc)包括:

Aat II Afl II Asc I Ase I BsaA I BsiW I BspM II
BssH II Eco72 I EcoR V Mlu I Nde I Nhe I Nru I
PaeR7 I Pme I Pml I Psp1406 I Rsr II SnaB I Spl I
Srf I Vsp I Xcm I Xho I

      pTNF-α-promoter-luc中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut ppTNF-α-promoter-luc once)包括:

Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 9 EcoN I CCTNN`N,NNAGG 3930
Bgl I GCCN,NNN`NGGC 9 BsiC I TT`CG,AA 4325
Acc65 I G`GTAC,C 15 BstB I TT`CG,AA 4325
Asp718 G`GTAC,C 15 Sal I G`TCGA,C 4339
Kpn I G,GTAC`C 19 ApaL I G`TGCA,C 4903
Bsa I GGTCTC 7/11 66 HgiE II ACCNNNNNNGGT -1/13 5168
EcoR I G`AATT,C 388 Not I GC`GGCC,GC 5409
Tth111 I GACN`N,NGTC 661 BstE II G`GTNAC,C 5436
Sac I G,AGCT`C 911 Ahd I GACNN,N`NNGTC 5511
Bgl II A`GATC,T 1012 Pvu I CG,AT`CG 5881
Hind III A`AGCT,T 1022 Sac II CC,GC`GG 5905
BsrG I T`GTAC,A 1547 Bst1107 I GTA|TAC 6021
Dra III CAC,NNN`GTG 2203 Xca I GTA|TAC 6021
Mun I C`AATT,G 2883 Spe I A`CTAG,T 6340
BamH I G`GATC,C 2976 BsmB I CGTCTC 7/11 6353

      pTNF-α-promoter-luc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      RVprimer3(6504-6523):
      CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC
      pTNF-α-promoter-luc的全序列信息: D2480-pTNF-α-promoter-luc-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2480-1μg pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒) 1μg
D2480-100μg pTNF-α-promoter-luc (报告基因质粒) 100μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pTNF-α-promoter-luc可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用碧云天的萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG005/RG006)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
4. LPS等是常见的可以激活TNF-α的转录的试剂,可以用作pTNF-α-promoter-luc报告基因检测时的阳性对照。
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使用本产品的文献:
1. He J, Wang S, Zeng Y, You X, Ma X, Wu N, Wu Y.
Binding of CD14 to Mycoplasma genitalium-derived lipid-associated membrane proteins upregulates TNF-α.
Inflammation. 2014 Apr;37(2):322-30.