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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
BeyoFast™ BstEII
产品编号: D5665-100μl
产品包装:100μl
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价格: ¥ 158.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D5665-100μl BeyoFast™ BstEII 100μl 158.00元

碧云天生产的BeyoFast™系列快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在5-15分钟内仅使用一种缓冲液就能快速完成DNA酶切的高品质限制性内切酶。

BeyoFast™系列快速内切酶适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。

BeyoFast™系列快速内切酶具有如下优点。(1) 5-15分钟内就能完成酶切;(2) 所有BeyoFast™系列内切酶共用一种酶切缓冲液CutEZ™ Buffer,大大简化酶切反应体系,方便进行双酶切或多酶切;(3) 针对不同酶在CutEZ™ Buffer中活性存在差异的问题,调整了不同酶的浓度,可以统一按照每20μl体系加入1μl酶量的用量进行酶切反应;(4) Alkaline Phosphatase、Antarctic Phosphatase、T4 DNA Ligase、T4 Polynucleotide Kinase、T4 PNK (3' phosphatase minus)等很多修饰酶等都100%兼容CutEZ™ Buffer (具体的兼容性表请参考https://www.beyotime.com/product/D6018.htm),使“酶切-连接”和“酶切-修饰-连接”等反应体系可以兼容,支持一管化反应;(5) 良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。

酶活性检测:最适反应温度下,在20μl反应体系中,1μl BeyoFast™ BstEII能够在15min内完全消化1μg pUC19-BstEII DNA。

长时间酶切检测:最适反应温度下,将1μl BeyoFast™ BstEII与1μg pUC19 BstEII DNA共同温育3h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测:最适反应温度下,使用1μl BeyoFast™ BstEII消化底物,回收酶切产物,在22℃下使用适量T4 DNA Ligase可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

非特异性内切酶活性检测:最适反应温度下,将1μl BeyoFast™ BstEII与1μg超螺旋质粒DNA共同温育4h,使用琼脂糖凝胶电泳检测,质粒DNA仍然处于超螺旋状态。

BeyoFast™ BstEII快速内切酶基本信息如下:

识别序列 同裂酶 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
5'-G^GTNACC-3'
3'-CCANTG^G-5'
BstPI, Eco91I, EcoO65I, PspEI 37℃ 80℃ 20min 有时有干扰

BeyoFast™ BstEII快速内切酶在不同反应缓冲液中的活性(缓冲液兼容性)如下:

Beyotime CutEZ™ Buffer Beyotime Easy-Load™ CutEZ™ Buffer Thermo FastDigest Buffer NEB CutSmart® Buffer Takara QuickCut™ Buffer
100% 100% 75% 100% 75%

注:活性数据来自碧云天BeyoFast™系列快速内切酶的标准反应体系下的检测。

BeyoFast™ BstEII快速内切酶识别位点的甲基化影响请参考下表:

Dam Dcm CpG EcoKI EcoBI
无影响 无影响 无影响 序列可能重叠
剪切可能受影响
序列可能重叠
剪切可能受影响
包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D5665-100μl BeyoFast™ BstEII 100μl
D6018-1ml 10X CutEZ™ Buffer 1ml
D6020-1ml Easy-Load™ 10X CutEZ™ Buffer 1ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

不含核酸酶的超纯水推荐选购碧云天的ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性,遇到可能存在甲基化干扰问题时,可以尝试同裂酶。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系,在冰浴上进行操作。
Reagent Plasmid DNA PCR Product Genomic DNA
Ultrapure Water (17-x)µl (26-x)µl (40-x)µl
10X CutEZ™ Buffer or
Easy-Load™ 10X CutEZ™ Buffer
2µl 3µl 5µl
Substrate DNA xµl(up to 1µg) xµl(~0.2µg) xµl(5µg)
BeyoFast™ BstEII 1µl 1µl 5µl
Total volume 20µl 30µl 50µl
Incubate at 37℃ 15min 15-30min 30-60min
注:上述反应体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物有一定的离子强度和pH,10X CutEZ™ Buffer加入量可适当减少至2μl。但由于很多DNA聚合酶同时具有外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行连接、克隆等操作,建议酶切前对PCR产物进行纯化。
a. 参考上表依次加入各种液体后,用移液器轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋混合),然后瞬时离心以沉降液体至管底。
b. 37℃温育15min (质粒),或15-30min (PCR产物),或30-60min (基因组DNA)。酶切反应时优先推荐使用水浴,反应温度通常更加恒定一些。
c. 80℃温育20min即可使酶失活并停止反应(可选)。
2. 双或多酶切时可以在参考上表单酶切反应体系设置的基础上,参考如下原则设置反应体系。
a. 每种快速内切酶的用量为1μl,并根据需要适当扩大反应体系;
b. 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10;
c. 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先从最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
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产品编号 产品名称 包装
D6049 ApaI 2000U
D6053 BamHI 2000U
D6093 BglII 500U
D6257 DpnI 500U
D6258 DpnI 2500U
D6329 EcoRI 2000U
D6330 EcoRI 5000U
D6337 EcoRV 1500U
D6389 HindIII 2000U
D6390 HindIII 5000U
D6417 KpnI 1000U
D6449 MluI 1000U
D6481 NcoI 200U
D6485 NdeI 400U
D6489 NheI 200U
D6497 NotI 150U
D6565 PstI 1000U
D6566 PstI 3000U
D6581 PvuII 1000U
D6585 RsaI 200U
D6593 SacI 500U
D6597 SalI 1000U
D6633 SmaI 500U
D6713 XbaI 1500U
D6721 XhoI 2000U
D6847-50μl SgeI 50μl
D5601-200μl BeyoFast™ ApaLI 200μl
D5609-50μl BeyoFast™ AscI 50μl
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D5625-500μl BeyoFast™ BamHI 500μl
D5633-125μl BeyoFast™ BclI 125μl
D5641-100μl BeyoFast™ BglII 100μl
D5649-50μl BeyoFast™ BsaI 50μl
D5657-100μl BeyoFast™ BstBI 100μl
D5665-100μl BeyoFast™ BstEII 100μl
D5673-50μl BeyoFast™ ClaI 50μl
D5681-50μl BeyoFast™ DpnI 50μl
D5689-50μl BeyoFast™ DpnII 50μl
D5697-25μl BeyoFast™ EagI 25μl
D5705-600μl BeyoFast™ EcoRI 600μl
D5713-200μl BeyoFast™ EcoRV 200μl
D5721-30μl BeyoFast™ Esp3I (BsmBI ) 30μl
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D5801-200μl BeyoFast™ NdeI 200μl
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