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内切酶与外切酶

SmaI
产品编号: D6633
产品包装: 500U
产品价格: 136.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D6633 SmaI 500U 136.00元

      SmaI内切酶为进口分装,基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
CCC^GGG
GGG^CCC
1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 30℃ 65℃ 
20min
有时有干扰
50-100 0-20 0-20 0-20 100 0-20

      根据识别序列邻近序列的不同,酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。
      酶储存液组成为:10mM Tris-HCl(pH7.4 at 25℃),100mM KCl,1mM DTT,1mM EDTA,0.2mg/ml BSA and 50% glycerol。
      1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate(pH7.9 at 37℃),10mM magnesium acetate,66mM potassium acetate,
0.1mg/ml BSA。
      酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>90%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(recut)。
      活性单位定义:在37℃,50微升反应体系中反应1小时,将1微克的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位,即1U。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D6633-1 SmaI(10U/μl) 500U
D6010Y  10X Buffer Y 1ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。
特别注意:
      本SmaI的推荐孵育温度为30℃,37℃孵育有50%的酶活性,25℃孵育有100%的酶活性。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行:

待酶切DNA 不超过1μg
双蒸水或Milli-Q水 适量
10X Buffer Y 2μl
SmaI 0.5-1μl
总体积 20μl
37℃孵育1小时或更长时间

说明:请注意把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。

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