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细胞相关> 细胞标记与染色> 荧光染色
产品编号: C2239-20ml
产品包装:20ml
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价格: ¥ 705.64
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C2239-5ml 即用型微丝红色荧光染色液(Actin-Tracker Red-Rhodamine) 5ml 198.00元
C2239-20ml 即用型微丝红色荧光染色液(Actin-Tracker Red-Rhodamine) 20ml 598.00元

碧云天的即用型微丝红色荧光染色液(Actin-Tracker Red-Rhodamine),即Ready-to-Use Microfilament Red Fluorescence Staining Solution with Actin-Tracker Red-Rhodamine,是基于微丝红色荧光探针Actin-Tracker Red-Rhodamine,主要用于培养细胞或组织切片的Actin特异性荧光染色的一种即用型染色液。本染色液适用于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等荧光检测设备。

Actin-Tracker Red-Rhodamine探针为荧光染料Rhodamine标记的鬼笔环肽(phalloidin, 又称鬼笔毒素或毒蕈肽),即罗丹明标记的鬼笔环肽(phalloidin-Rhodamine),最大激发波长为540nm,最大发射波长为565nm。Actin-Tracker Red-Rhodamine的荧光光谱和Cy3比较接近,可以用Cy3的检测条件进行检测。

鬼笔环肽是从担子类真菌死亡帽蘑菇(death cap mushroom)鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)中分离出来的一种多肽,可特异性与真核生物的丝状的肌动蛋白(filamentous actin, F-actin)结合,从而阻止肌动蛋白解聚。微丝(microfilaments)是由肌动蛋白分子螺旋状聚合成的纤丝,所以鬼笔环肽最终可以破坏细胞内微丝的聚合-解聚动态平衡,而对细胞产生毒性。利用鬼笔环肽具有使微丝保持稳定这一生物学特点,使用荧光染料标记的鬼笔环肽可以非常方便的显示细胞内微丝的形态和分布,从而使微丝荧光探针广泛应用于生物、医学研究[1-2]。

罗丹明标记的肌动蛋白发出具有独一无二的高亮度和光稳定性的红色荧光。罗丹明标记的鬼笔环肽极少会非特异性染色,可使肌动蛋白染色效果高对比度显示,也是文献中最常提及的荧光鬼笔环肽偶联物。

本染色液有以下特点。使用便捷:本产品为即用型染色液,无需任何配制,即可直接使用;用量少:本染色液可在纳摩尔水平染色F-actin;不区分种属:不同于抗体,鬼笔环肽与F-actin的结合力在不同物种间没有显著变化,非特异性染色基本可以忽略,染色和未染色区域具有明显的辨识度;对F-actin与其它蛋白结合的影响小:本染色液中Actin-Tracker Red-Rhodamine探针直径大约为1.2~1.5nm,分子量小于2000Da,与F-actin结合后不影响与多种肌动蛋白结合蛋白结合,包括肌球蛋白、原肌球蛋白和后肌钙蛋白等;基本不影响F-actin的功能:本染色液标记后的肌动蛋白丝仍旧保持功能,标记的肌纤维能够收缩,标记的肌球蛋白可以继续移动;亲和力一致:在各种植物细胞或动物细胞中,本染色液对大、小微丝具有相似的亲和力,每个肌动蛋白可以结合一个鬼笔环肽分子,因此本染色液也可用于对细胞中F-actin进行定量研究。

本产品可以用于细胞或组织内的微丝的荧光检测。使用本产品染色细胞内微丝的效果参考图1。

图1.碧云天即用型微丝红色荧光染色液(Actin-Tracker Red-Rhodamine) (C2239)染色NRK-52E (大鼠肾小管上皮细胞)的效果图。经本产品染色的NRK-52E细胞可见红色细丝状形态微丝(图B),细胞核采用Hoechst 33342染色(图C),微丝红色荧光和细胞核蓝色荧光的叠加(Merge)效果见图D。本图仅作参考,不同的样品不同的检测条件,实际获得的结果可能有所差别。

对于96孔板中的样品,按照每孔使用100μl染色液计算,每5ml和20ml的本产品可以进行50次和200次检测;如果用于流式细胞仪检测,按照每个样品的检测体系体积为0.5ml时,每5ml和20ml的本产品可以进行10次和40次检测;对于6孔板中的贴壁培养细胞样品,按照每孔使用1ml染色液计算,每5ml和20ml的本产品可以进行5次和20次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
C2239-5ml 即用型微丝红色荧光染色液(Actin-Tracker Red-Rhodamine) 5ml
C2239-20ml 即用型微丝红色荧光染色液(Actin-Tracker Red-Rhodamine) 20ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC避光保存,一年有效。

注意事项:

尽管经测试本产品反复冻融5次对于检测效果无显著影响,为保证本产品的稳定性、取得良好的使用效果,第一次解冻后建议适当分装后保存。在反复冻融过程中,可能会导致染色液逐渐失效,进而影响检测效果。

荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

Phalloidin有一定毒性(LD50为2mg/kg体重),1ml Actin-Tracker Red中的phalloidin少于0.2mg,使用时请注意适当防护。

需自备盖玻片和载玻片(可以向碧云天订购)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.荧光显微镜检测。
a.接种培养。将细胞接种于96孔板等多孔板或细胞培养皿中,按照实验设计对细胞进行适当处理。
b.洗涤(选做)。对于贴壁细胞,吸除培养液,用PBS洗涤细胞1次;对于悬浮细胞,250-1000×g室温离心5分钟,吸除上清,用PBS洗涤1次。吸除培养液和PBS时最好使用真空泵。在能充分吸净残留液体的情况下,可以不使用PBS洗涤。
c.染色前准备。加入适当体积的4%多聚甲醛固定液(P0099),室温固定细胞15分钟,PBS洗涤1次。
d.染色。加入适当体积的本染色液。通常96孔板每孔加入100μl,24孔板每孔加入250μ1,12孔板每孔加入500μl,6孔板每孔加入1ml。室温避光孵育15分钟。孵育时间可在10-30分钟之间进行调整。
注1:如果是首次实验不能确定孵育时间,建议先尝试室温避光孵育15分钟,观察荧光效果。如果正常细胞染色过强,则适当缩短时间;如果荧光强度太弱,则适当延长时间。
注2:孵育后也可用PBS或HBSS洗涤1-3次。
注3:若需同时进行其它细胞器探针染色,可取适量本染色液至离心管,按照比例添加目的探针,同时进行染色。
e.检测。孵育结束后,即可在荧光显微镜下观察染色效果(Actin-Tracker Red-Rhodamine为红色荧光, Ex/Em=540/565nm)。
2.流式细胞仪检测。
a.接种培养。将细胞接种于6孔板或适当的细胞培养器皿中,按实验设计对细胞进行适当处理。
b.细胞准备。贴壁细胞胰酶消化后用培养液重悬,并用PBS洗涤1次;悬浮细胞250-1000×g室温离心5分钟,吸除上清,用PBS洗涤1次。每个样品推荐的细胞用量为50-100万个细胞。
c.染色前准备。加入适当体积的4%多聚甲醛固定液(P0099),室温固定细胞15分钟,PBS洗涤1次。
d.染色。加入0.5ml本染色液,重悬为单细胞悬液。室温避光孵育15分钟。孵育时间可在10-30分钟之间进行调整。
注1:如果是首次实验不能确定孵育时间,建议先尝试室温避光孵育15分钟,观察荧光效果。如果正常细胞染色过强,则适当缩短时间;如果荧光强度太弱,则适当延长时间。
注2:孵育后也可用PBS或HBSS洗涤1-3次。
注3:若需同时进行其它细胞器探针染色,可取适量本染色液至离心管,按照比例添加目的探针,同时进行染色。
e.检测。孵育完成后,可以直接进行流式细胞仪检测,也可以250-1000×g室温离心5分钟沉淀细胞,吸净液体后每个样品加入0.5ml PBS或HBSS重悬细胞后用流式细胞仪检测(Actin-Tracker Red-Rhodamine为红色荧光, Ex/Em=540/565nm, 推荐用PE (Ex/Em=488/585)通道进行检测)。
参考文献:
1.Mayr S, Hauser F, Peterbauer A, et al. Int J Mol Sci. 2018. 19(4):1150.
2.Schröder SK, Tag CG, Weiskirchen S, Weiskirchen R. Methods Mol Biol. 2023. 2669:55-66.
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