碧云天在线咨询


温馨提示:客服在线时间为工作日9:00-17:00。
其他时间请发送邮件,我们会尽快给您回复。

产品订购与售后服务:order@beyotime.com
技术咨询:info@beyotime.com

中文 |English
试剂
质粒抽提 |DNA纯化胶回收
基因组DNA抽提 |DNA电泳
DNA分子量标准 |菌种与培养
感受态制备 |T载体、质粒 |基因突变
DNA连接 |DNA标记和检测 |内切酶
修饰酶 |反转录 |PCR相关 |RNA相关
其他
|重组蛋白 |生化酶 |蛋白定量
裂解及蛋白抽提 |蛋白纯化
抗体制备 |蛋白电泳
蛋白分子量标准 |一抗 |二抗
Western |免疫沉淀 |免疫染色 |ELISA
细胞凋亡坏死 |细胞增殖 |自噬
细胞培养 |细胞组织染色 |细胞转染
细胞组分分离
EMSA相关 |报告基因相关
一氧化氮相关 |活性氧相关
炎症相关 |代谢相关
抑制剂激活剂等 |荧光探针
其他试剂盒
常用试剂
仪器
脱色摇床 |细菌培养摇床
漩涡振荡器 |混匀仪 |搅拌器
超声破碎仪 |匀浆机
其它混合破碎仪器 |移液器类
培养箱 |水浴锅 |干燥箱、烘箱
干式恒温器 |其它温控设备 |制冰机
定时器 |离心机 |氮吹仪 |旋转蒸发仪
真空泵及其它泵 |蠕动泵 |灭菌设备
洗板机 |超声波清洗器 |PCR仪
电泳设备 |蛋白转印设备
紫外分析仪 |分光光度计 |酶标仪
天平 |pH计 |电导仪 |氧化还原电位仪
溶氧仪 |超净工作台 |生物安全柜
冰冻切片机 |切片机 |组织包埋机
组织脱水机 |染色机
其它动物实验仪器
耗材
离心管 |PCR耗材 |冻存管 |枪头
移液管 |巴氏吸管
离心管盒、冻存盒 |冰盒 |离心管架
枪头盒 |培养皿 |培养板 |磁性分离
封板膜 |手套等防护用品 |载玻片
盖玻片 |存储盒 |染色缸染色架
其他染色耗材 |印迹膜与洗膜盒
胶片与暗盒 |滤纸、滤膜、滤器
空柱管 |蓝盖瓶 |其他实验耗材
订货电话:
400-1683301
800-8283301
电话订货时间:
周一至周五9:00-17:00
订货邮件:
order@beyotime.com
订货QQ:
4001683301
订单下载
碧云天订单.xls
产品目录下载
碧云天产品目录.pdf
订货须知
碧云天网站 微信公众号

 Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒

  产品编号C1067
  产品包装: 20次
  产品价格: 615.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
C1067 Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 20次 615.00元

      Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit)是用EGFP标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。
      Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白,参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性。
      Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)。磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。
      用带有绿色荧光的荧光探针EGFP标记的Annexin V,即Annexin V-EGFP,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。
      本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液,碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-EGFP可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。
      综上所述,用Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色后,正常的活细胞不被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色;凋亡早期的细胞仅被Annexin V-EGFP染色,碘化丙啶染色呈阴性;坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被Annexin V-EGFP和碘化丙啶染色。
      一个包装的本试剂盒共可以检测20个样品。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
C1067-1 Annexin V-EGFP 100μl
C1067-2 Annexin V-EGFP结合液 12ml
C1067-3 碘化丙啶染色液 220μl
说明书 1份

保存条件:
      4℃保存,半年有效。AnnexinV-EGFP和碘化丙啶染色液需要避光保存。为了长期保存,可以把碘化丙啶染色液适当分装后-20℃保存,Annexin V-EGFP结合液可以直接-20℃保存。
注意事项:
      如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-EGFP,最终导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.对于悬浮细胞:
A.在进行完细胞凋亡刺激后,1000g(约1000-2000rpm)离心5分钟,弃上清,收集细胞,用PBS轻轻重悬细胞并计数。注意:PBS重悬不能省略,PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用,可以保证后续Annexin V-EGFP的结合。
B.取5-10万重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,加入195μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细胞。
C.加入5μl Annexin V-EGFP,轻轻混匀。
D.加入10μl碘化丙啶染色液,轻轻混匀。
E.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟,随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善染色效果。
F.随即进行流式细胞仪检测,Annexin V-EGFP为绿色荧光,碘化丙啶(PI)为红色荧光。如果用于荧光显微镜检测,1000g离心5分钟,收集细胞,用50-100μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细胞,涂片后,荧光显微镜下观察。
2.对于贴壁细胞:
A.把细胞培养液吸出至一合适离心管内,PBS洗涤贴壁细胞一次,加入适量胰酶细胞消化液(可含有EDTA)消化细胞。室温孵育至轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时,吸除胰酶细胞消化液。需避免胰酶的过度消化。
B.加入步骤2A中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000g离心5分钟,弃上清,收集细胞,用PBS轻轻重悬细胞并计数。注意:加入步骤2A中的细胞培养液一方面可以收集已经悬浮的发生凋亡或坏死的细胞,另一方面细胞培养液中的血清可以有效抑制或中和残留的胰酶;残留的胰酶会消化并降解后续加入的Annexin V-EGFP导致染色失败。
C.取5-10万重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,加入195μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细胞。
D.加入5μl Annexin V-EGFP,轻轻混匀。
E.加入10μl 碘化丙啶染色液,轻轻混匀。
F.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟,随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善染色效果。
G.随即进行流式细胞仪检测,Annexin V-EGFP为绿色荧光,碘化丙啶(PI)为红色荧光。如果用于荧光显微镜检测,1000g离心5分钟,收集细胞,用50-100μl Annexin V-EGFP结合液轻轻重悬细胞,涂片后,荧光显微镜下观察。
3.对于贴壁细胞的原位荧光显微镜检测:
注:本方法的优点是可以原位观察细胞凋亡,缺点是部分凋亡由于不贴壁而检测不到。
A.(选做)如果条件许可,把细胞培养于24孔板、48孔板或96孔板内。在凋亡诱导结束后,用可以对多孔板进行离心的离心机1000g离心5分钟。
B.吸除细胞培养液,加入PBS洗涤一次。(如果条件许可,在吸除PBS前1000g离心5分钟。)
C.加入195μl Annexin V-EGFP结合液。
D.加入5μl Annexin V-EGFP,轻轻混匀。
E.加入10μl碘化丙啶染色液,轻轻混匀。
F.室温(20-25℃)避光孵育10-20分钟,随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光。孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善染色效果。
G.随即在荧光显微镜下观察,Annexin V-EGFP为绿色荧光,碘化丙啶(PI)为红色荧光。
相关产品请点击如下按钮:

使用本产品的文献:

1.Zhang B, Peng X, Li G, Xu Y, Xia X, Wang Q.
Oxidative stress is involved in Patulin induced apoptosis in HEK293 cells.
Toxicon. 2015 Feb;94:1-7.
2.Chen X, Li M, Li L, Xu S, Huang D, Ju M, Huang J, Chen K, Gu H.
Trehalose, sucrose and raffinose are novel activators of autophagy in human keratinocytes through anmTOR-independent pathway.
Sci Rep. 2016 Jun 22;6:28423.