碧云天在线咨询


温馨提示:客服在线时间为工作日9:00-17:00。
其他时间请发送邮件,我们会尽快给您回复。

产品订购与售后服务:order@beyotime.com
技术咨询:info@beyotime.com

中文 |English
试剂
质粒抽提 |DNA纯化胶回收
基因组DNA抽提 |DNA电泳
DNA分子量标准 |菌种与培养
感受态制备 |T载体、质粒 |基因突变
DNA连接 |DNA标记和检测 |内切酶
修饰酶 |反转录 |PCR相关 |RNA相关
其他
|重组蛋白 |生化酶 |蛋白定量
裂解及蛋白抽提 |蛋白纯化
抗体制备 |蛋白电泳
蛋白分子量标准 |一抗 |二抗
Western |免疫沉淀 |免疫染色 |ELISA
细胞凋亡坏死 |细胞增殖 |自噬
细胞培养 |细胞组织染色 |细胞转染
细胞组分分离
EMSA相关 |报告基因相关
一氧化氮相关 |活性氧相关
炎症相关 |代谢相关
抑制剂激活剂等 |荧光探针
其他试剂盒
常用试剂
仪器
脱色摇床 |细菌培养摇床
漩涡振荡器 |混匀仪 |搅拌器
超声破碎仪 |匀浆机
其它混合破碎仪器 |移液器类
培养箱 |水浴锅 |干燥箱、烘箱
干式恒温器 |其它温控设备 |制冰机
定时器 |离心机 |氮吹仪 |旋转蒸发仪
真空泵及其它泵 |蠕动泵 |灭菌设备
洗板机 |超声波清洗器 |紫外分析仪
酶标仪 |天平 |pH计 |电导仪
氧化还原电位仪 |溶氧仪
超净工作台 |生物安全柜
耗材
离心管 |PCR耗材 |冻存管 |枪头
移液管 |巴氏吸管
离心管盒、冻存盒 |冰盒 |离心管架
枪头盒 |培养皿 |培养板 |磁性分离
封板膜 |手套等防护用品 |载玻片
盖玻片 |存储盒 |染色缸染色架
其他染色耗材 |印迹膜与洗膜盒
胶片与暗盒 |滤纸、滤膜、滤器
空柱管 |蓝盖瓶 |其他实验耗材
订货电话:
400-1683301
800-8283301
电话订货时间:
周一至周五9:00-17:00
订货邮件:
order@beyotime.com
订货QQ:
4001683301
订单下载
碧云天订单.xls
产品目录下载
碧云天产品目录.pdf
订货须知
碧云天网站 微信公众号

 RNAeasy™ Plus动物RNA抽提试剂盒(离心柱式)

  产品编号R0032
  产品包装: 50次
  产品价格: 498.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
R0032 RNAeasy™ Plus动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次 498.00元

      碧云天的离心柱式RNAeasy™ Plus动物RNA抽提试剂盒(RNAeasy™ Plus Animal RNA Isolation Kit with Spin Column)是一种基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提总RNA的试剂盒。总RNA包括大于200个核苷酸的RNA(也常被称为总RNA)和小于200个核苷酸的小RNA(small RNA)。
      本试剂盒抽提得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对RNA质量要求较高的情况。
      碧云天的三款离心柱式及Trizol法RNA抽提试剂盒的主要特点和差异如下:

产品编号 R0024/ R0026/ R0027 R0028 R0032 R0011/R0016
产品名称 RNAeasy™动物RNA
抽提试剂盒
RNAeasy™动物小RNA
抽提试剂盒
RNAeasy™ Plus动物RNA
抽提试剂盒
Beyozol
Trizol
推荐指数 ★★★★★ ★★★★★ ★★★ ★★
抽提方式 离心柱式 离心柱式 离心柱式 原始方式
抽提产物 RNA(>200nt) 小RNA(<200nt) 总RNA
(含<200nt的小RNA)
总RNA
(含<200nt的小RNA)
操作时间 最短(15-20分钟) 稍较长(20-25分钟) 较长(25-30分钟) 最长(45-60分钟)
操作步骤 4步骤() 6步骤() 6步骤() 很多步骤
使用便捷性 ★★★★★ ★★★★ ★★★★ ★★
推荐细胞量/得率 50-100万/5-20μg 50万/1-2μg 50-100万/5-20μg 50-100万/5-20μg
推荐组织量/得率 5-20mg/10-40μg() 5mg/1-1.5μg() 3-5mg/3-10μg() 50mg/100-500μg(很多)
RNA纯度
有毒有害试剂
人体与环境安全
国外同类产品 RNeasy Mini Kit (Qiagen)
PureLink® RNA Mini Kit
(Thermo)
PureLink® miRNA
Isolation Kit (Thermo)
miRNeasy Mini Kit
(Qiagen)
TRIzol (Thermo)
用途 非小RNA相关各种用途 小RNA相关各种用途 不同长度RNA各种用途 不同长度RNA各种用途

      动物组织或细胞中的RNA按照长度可以分为长链RNA(long RNA)和小RNA(small RNA),长链RNA通常大于200nt,而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。
      本试剂盒抽提总RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解,释放出总RNA与小RNA,通过两次特异性结合体系过同一纯化柱,分别结合>200nt的RNA和<200nt的小RNA,同时有效避免了杂质大量析出而阻塞纯化柱,抽提得到包括>200nt的RNA和小RNA的总RNA,基因组DNA和蛋白等杂质被有效去除,然后通过洗涤去除非特异性结合的蛋白等杂质,最后用洗脱液将总RNA洗脱下来。


图1. 离心柱式总RNA(>200nt的RNA和<200nt的小RNA)抽提流程示意图

      本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行总RNA分离纯化,能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。
      本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用柱纯化,无需繁琐的RNA沉淀步骤,抽提操作过程仅25-30分钟。相比于传统的Trizol抽提法,本试剂盒的操作流程显著简化,缩短了抽提时间,降低了RNA降解的风险。
      本试剂盒抽提总RNA的得率高。本试剂盒的抽提效果经反复测试,100万个冻存的HeLa细胞能抽提得到约15-20μg总RNA,5mg冻存的小鼠肝组织能抽提得到约6-10μg总RNA,5mg冻存的小鼠肾组织能抽提得到约3-5μg总RNA。不同来源的样品可能有所差异,通常新鲜样品的得率高于冻存样品。本试剂盒的抽提效果参见图2。

      图2. 本试剂盒总RNA抽提效果。样品为冻存的50万个HeLa细胞、5mg小鼠肝组织和5mg小鼠肾组织。洗脱液用量均为40μl。均取6μl洗脱的样品经变性处理后,在含6.67%甲醛和适量NA-Red的1.2%变性琼脂糖凝胶中电泳约45分钟后拍照。抽提产物的得率依次为9.6μg、8.5μg和4.1μg,A260/A280依次为2.11、2.10和2.09,A260/A230依次为2.01、1.98和1.94。实际抽提效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,本图仅供参考。

注:纯的RNA其A260/A280约为2.0,但在很多仪器上测定时会高于2.0,低于1.9通常认为有蛋白、DNA或者酚等的污染;纯的RNA其A260/A230约为2.0左右或者略高,低于1.9通常认为有碳水化合物、胍盐、多肽或酚等的污染。
      本试剂盒抽提得到的总RNA纯度高,显著优于Trizol方法。抽提得到的总RNA的A260/A280通常为2.0-2.2。A260/A230通常为1.9-2.1。本试剂盒抽提获得的RNA的实测纯度参见图2。
      本试剂盒适用于新鲜或冻存的动物组织或细胞总RNA与小RNA的抽提,推荐的细胞用量为50-100万,组织用量为3-5mg。
      本试剂盒可用于50个样品的总RNA(含小RNA)抽提。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
R0032-1 裂解液 16ml
R0032-2 结合液I 16ml
R0032-3 结合液II 38ml
R0032-4 洗涤液I 32ml
R0032-5 洗涤液II 63ml
R0032-6 洗脱液 5ml
R0032-7 RNA纯化柱及废液收集管 50套
R0032-8 RNA洗脱管 50个
说明书 1份

保存条件:
      室温保存,一年有效。
注意事项:
      对于富含RNase的样品(如动物组织),建议使用前在裂解液中添加二硫苏糖醇(Dithiothreitol, DTT)至终浓度为40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巯基乙醇至终浓度为1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巯基乙醇),含DTT或β-巯基乙醇的裂解液可在室温放置1个月。
      通过本试剂盒抽提到的RNA已经去除绝大多数DNA,通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对极少量DNA残留较敏感的实验,则需要在使用说明中步骤5离心后,在纯化柱中加入适量DNase I (如80μl含10U DNase I的酶溶液,推荐使用碧云天的DNase I,D7076),室温消化15分钟。消化结束后,不要离心,直接加入500μl洗涤液II,进入使用说明的步骤6进行操作。
      本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free,操作时应小心,避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话,以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
      对于操作环境中RNA酶的去除,推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。
      使用冻存的细胞或组织抽提RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品中的RNA。对于组织样品,推荐使用碧云天生产的RNALater™动物组织RNA稳定保存液(R0118)进行保存以保证样品RNA的完整性。
      本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
      废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
      结合液I、II和洗涤液II中含有乙醇,使用后须旋紧瓶盖以防挥发,并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.实验材料的准备,与样品的裂解。
细胞样品:收集50-100万左右的细胞,1000-2000g离心1分钟后弃上清,加入300μl裂解液,轻轻吹打8-10次至固悬物溶解、溶液澄清。
组织样品:取3-5mg动物组织,置于液氮中研磨成粉末,立即加入300μl裂解液。也可将组织置于1.5ml离心管中,迅速加入300μl裂解液,用微型电动匀浆器匀浆,或者用普通玻璃匀浆器进行匀浆。研磨或匀浆后,轻轻吹打匀浆液8-10次,室温放置3-5分钟。然后约14,000g离心2分钟,将上清液移至新的离心管中。对于比较容易裂解且匀浆很充分的组织(如肝组织、脑组织等)可以不用高速离心而直接进入步骤2。
注意:细胞的数量一般不超过200万,动物组织的用量一般不超过10mg,用量过多可能会因裂解不充分导致得率下降。如果裂解后仍有粘稠物,需增加吹打次数至溶液完全澄清。对于富含RNase的样品,裂解液中宜添加DTT至终浓度为40mM或添加β-巯基乙醇至终浓度为1%。
2.加入300μl结合液I至裂解液中,轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生,属于正常现象。
3.将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内,12,000g离心30秒,回收收集管内液体至一新的1.5ml离心管。

注意:对于一些特殊的样品,如出现溶液未完全通过时,可延长离心时间至1-2分钟,或者加大离心力至16,000g。对于一些能快速启动达到12,000g的离心机,离心30秒已经足够,对于一些启动速度缓慢的离心机本步骤及后续步骤中的30秒离心宜调整为60秒。
4.向回收的液体中加入700μl结合液II,混匀后,将混合物(包括沉淀物)分两次通过上一步的纯化柱,每次12000g离心30秒后倒弃收集管内液体。
注意:
加入结合液II后溶液总体积超过纯化柱的容量(约750μl),因此须分成2次过柱,即将一半的混合物(约650μl)加入纯化柱内后12000g离心30秒,倒弃收集管内液体,再将剩余的混合物加入纯化柱内12000g离心30秒,并倒弃收集管内液体。
5. 加入600μl洗涤液I,12,000g离心30秒,倒弃收集管内液体。
6.加入600μl洗涤液II,12,000g离心30秒,倒弃收集管内液体。
7.重复步骤6一次。
8.最高速(约14,000-16,000g)离心2分钟,去除残留的液体。
9.将RNA纯化柱置于一新的本试剂盒中提供的1.5ml RNase-free离心管上,加入30-50μl洗脱液,室温放置2-3分钟,最高速离心30秒,所得溶液即为纯化的总RNA。

注意:洗脱液需要加到纯化柱柱面中央,使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品,可把洗脱液的体积减小至20μl,但洗脱下来的总RNA量会相对减少。室温较低时,洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外,洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次,可提高得率约10-30%;或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次,会获得约为第一次洗脱量15-35%的RNA。

相关产品:

产品编号 产品名称 包装
R0011 Beyozol (总RNA抽提试剂) 100ml
R0016 Trizol (总RNA抽提试剂) 100ml
R0021 DEPC水(DNase、RNase free) 100ml
R0022 DEPC水(DNase、RNase free) 500ml
R0024 RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 12次
R0026 RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次
R0027 RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 200次
R0028 RNAeasy™动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次
R0032 RNAeasy™ Plus动物RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次
R0035 BeyoMag™磁珠法动物总RNA抽提试剂盒 50次
R0118 RNALater™动物组织RNA稳定保存液 100ml
R0121 AllProtect™动物组织核酸、蛋白稳定保存液 25ml
R0122 AllProtect™动物组织核酸、蛋白稳定保存液 100ml
R0123 RNase and DNase Away 250ml
R0125 RNase, DNase and DNA Away 250ml
R0127 RNase, DNase, RNA and DNA Away 250ml
ST036 DEPC 10g
相关产品请点击如下按钮: