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 RNAeasy™动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式)

  产品编号R0028
  产品包装: 50次
  产品价格: 598.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
R0028 RNAeasy™动物小RNA抽提试剂盒(离心柱式) 50次 598.00元

      碧云天的离心柱式RNAeasy™小RNA抽提试剂盒(RNAeasy™ Small RNA Isolation Kit with Spin Column),也称离心柱式miRNA抽提试剂盒(miRNA Isolation Kit with Spin Column),是一种基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提miRNA等小于200个核苷酸(nucleotide, nt)的小RNA(small RNA)的试剂盒。
      本试剂盒抽提得到的小RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern等常规实验,也可以用于基因芯片分析
(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对小RNA质量要求较高的情况。
      碧云天的三款离心柱式及Trizol法RNA抽提试剂盒的主要特点和差异如下:

产品编号 R0024/ R0026/ R0027 R0028 R0032 R0011/R0016
产品名称 RNAeasy™动物RNA
抽提试剂盒
RNAeasy™动物小RNA
抽提试剂盒
RNAeasy™ Plus动物RNA
抽提试剂盒
Beyozol
Trizol
推荐指数 ★★★★★ ★★★★★ ★★★ ★★
抽提方式 离心柱式 离心柱式 离心柱式 原始方式
抽提产物 RNA(>200nt) 小RNA(<200nt) 总RNA
(含<200nt的小RNA)
总RNA
(含<200nt的小RNA)
操作时间 最短(15-20分钟) 稍较长(20-25分钟) 较长(25-30分钟) 最长(45-60分钟)
操作步骤 4步骤() 6步骤() 6步骤() 很多步骤
使用便捷性 ★★★★★ ★★★★ ★★★★ ★★
推荐细胞量/得率 50-100万/5-20μg 50万/1-2μg 50-100万/5-20μg 50-100万/5-20μg
推荐组织量/得率 5-20mg/10-40μg() 5mg/1-1.5μg() 3-5mg/3-10μg() 50mg/100-500μg(很多)
RNA纯度
有毒有害试剂
人体与环境安全
国外同类产品 RNeasy Mini Kit (Qiagen)
PureLink® RNA Mini Kit
(Thermo)
PureLink® miRNA
Isolation Kit (Thermo)
miRNeasy Mini Kit
(Qiagen)
TRIzol (Thermo)
用途 非小RNA相关各种用途 小RNA相关各种用途 不同长度RNA各种用途 不同长度RNA各种用途

      动物组织或细胞中的RNA按照长度可以分为长链RNA(long RNA)和小RNA(small RNA),长链RNA通常大于200nt(也常被称为总RNA),而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。
      本试剂盒抽提小RNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解,释放出总RNA,然后在两次高速离心过程中,通过离心柱将不同大小的RNA分离。第一次过柱时,200nt以上的RNA特异性结合到纯化柱上,而200nt以下的小RNA穿柱而过被收集到液体收集管中;第二次过柱时,特定的结合体系使小RNA结合到另一个纯化柱上。然后通过2次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质,最后用洗脱液将高纯度的小RNA洗脱下来。


图1. 离心柱式小RNA抽提流程示意图

      本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行小RNA分离纯化,不仅能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂,也能有效避免如国外知名的Q品牌等公司使用类似于Trizol的裂解液裂解样品、接着使用氯仿分层、后续再进行柱纯化等涉及的有毒有害有机试剂。
      本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用柱纯化,无需繁琐的RNA沉淀步骤,抽提操作过程仅20-25分钟。相比于传统的Trizol抽提法,本试剂盒能够有效去除大分子RNA,操作流程显著简化,缩短了抽提时间,降低了RNA降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比,所需操作步骤和操作时间基本一致。
      本试剂盒抽提获得的小分子量RNA得率高、纯度好。100万培养动物细胞约能抽提得到1-2μg小RNA,5mg小鼠肝脏组织约能抽提得到1-1.5μg小RNA。A260/A280通常为2.0-2.2。本试剂盒与国际知名T品牌同类产品的抽提效果对比图参见图2。

      图2.本试剂盒与T品牌同类产品的小RNA抽提效果对比。样品为冻存的100万个HeLa细胞、5mg小鼠肝组织和5mg小鼠肾组织。洗脱液用量均为30μl。均取6μl洗脱的样品经变性处理后,在含7M尿素的15% TBE-PAGE中电泳约90分钟后在NA-Red溶液中染色后拍照。碧云天试剂盒抽提产物的A260/A280依次为2.01、2.07和2.06;T品牌试剂盒抽提产物的A260/A280依次为1.93、1.79和1.29。实际抽提效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,本图仅供参考。

      本试剂盒用于抽提18-200 nt小RNA,主要包括5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA (miRNA),以及short
interfering RNA (siRNA)、piRNA、tsRNA等,能够有效去除基因组DNA和200nt以上的RNA,如28S rRNA、18S rRNA、mRNA等。
      本试剂盒适用于新鲜或冻存的动物组织或细胞样品小RNA的抽提。样品的用量对抽提效果影响较大,样品用量过多会导致在第一次过柱时不能最大程度去除200nt以上的RNA,通常建议培养细胞的用量不超过100万,动物组织的用量不超过5mg。
      本试剂盒可用于50个样品的小RNA抽提。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
R0028-1 裂解液 16ml
R0028-2 结合液I 16ml
R0028-3 结合液II 38ml
R0028-4 洗涤液 63ml
R0028-5 洗脱液 5ml
R0028-6 RNA纯化柱及废液收集管 100套
R0028-7 RNA洗脱管 50个
说明书 1份

保存条件:
      室温保存,一年有效。
注意事项:
      对于富含RNase的样品(如动物组织),建议使用前在裂解液中添加二硫苏糖醇(Dithiothreitol, DTT)至终浓度为40mM (例如1ml裂解液中加入20μl 2M DTT)或β-巯基乙醇至终浓度为1% (如1ml裂解液中加入10μl β-巯基乙醇),含DTT或β-巯基乙醇的裂解液可在室温放置1个月。
      本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free,操作时应小心,避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话,以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
      对于操作环境中RNA酶的去除,推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。
      使用冻存的细胞或组织抽提小RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品中的RNA。对于组织样品,推荐使用碧云天生产的RNALater™动物组织RNA稳定保存液(R0118)进行保存以保证样品RNA的完整性。
      本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
      废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
      结合液I、结合液II和洗涤液中含有乙醇,使用后须旋紧瓶盖以防挥发,并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.实验材料的准备。
细胞样品:收集50万细胞,1000-2000g离心1分钟后弃上清,加入300μl裂解液,轻轻吹打8-10次至固悬物溶解、溶液澄清。
组织样品:取5mg动物组织,置于液氮中研磨成粉末,立即加入300μl裂解液。也可将组织置于1.5ml离心管中,迅速加入300μl裂解液,用微型电动匀浆器匀浆,或者用普通玻璃匀浆器进行匀浆。研磨或匀浆后,轻轻吹打匀浆液8-10次,室温放置3-5分钟。然后约14,000g离心2分钟,将上清液移至新的离心管中。对于比较容易裂解且匀浆很充分的组织(如肝组织、脑组织等)可以不用高速离心而直接进入步骤2。
注意:细胞的数量不超过100万,动物组织的用量不超过5mg,细胞或组织用量过多会导致大分子RNA不能去除完全。对于富含RNase的样品,裂解液中宜添加DTT至终浓度为40mM或添加β-巯基乙醇至终浓度为1%。
2.加入300μl结合液I至裂解液中,轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生,属于正常现象。
3. 将混合物(包括沉淀物)转移至第1个纯化柱内,12,000g离心30秒,回收收集管内液体至一新的1.5ml离心管。

注意:对于一些非常特殊的样品,如出现溶液未完全通过时,可延长离心时间至1-2分钟,或者加大离心力至16,000g。对于一些能快速启动达到12,000g的离心机,离心30秒已经足够,对于一些启动速度缓慢的离心机本步骤及后续步骤中的30秒离心宜调整为60秒。
4.向溶液中加入700μl结合液II,混匀后,将混合物(包括沉淀物)分两次转移至第2个纯化柱内,每次12,000g离心30秒后倒弃收集管内液体。
注意:
加入结合液II后溶液总体积超过纯化柱的容量(约750μl),因此须分成2次过柱,即将一半的混合物(约650μl)加入纯化柱内后12000g离心30秒,倒弃收集管内液体,再将剩余的混合物加入纯化柱内12000g离心30秒,并倒弃收集管内液体。
5.加入600μl洗涤液,12,000g离心30秒,倒弃收集管内液体。
6.重复步骤5一次。
7.最高速(约14,000-16,000g)离心2分钟,去除残留液体。
8.将RNA纯化柱置于一新的1.5ml离心管上,加入30-50μl洗脱液,室温放置2-3分钟,最高速离心30秒,所得溶液即为纯化的小RNA。

注意:洗脱液需要加到纯化柱柱面中央,使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品,可把洗脱液的体积减小至20ul,但洗脱下来的总RNA量会相对减少。室温较低时,洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外,洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次,可提高得率约10-30%;或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次,会获得约为第一次洗脱量10-35%的小RNA。

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