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 DNase I

  产品编号D7076
  产品包装: 1000U
  产品价格: 459.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7076 DNase I 1000U 459.00元

      DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。
      DNase I活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
      特点:不含RNase(RNase free),可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNase I失活所需的EDTA。
      用途:制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板; DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
      来源:从牛胰腺纯化得到。
      分子量:约32kDa(单体)。
      活性定义:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
      活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),10mM MgSO4,1mM CaCl2,1μg of pBR322 DNA。
      纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
      酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol。
      Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),25mM MgCl2,1mM CaCl2
      失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的SDS,DTT、巯基乙醇等还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7076-1 DNase I,RNase-free(50U/μl) 1000U
D7076-2 Reaction Buffer(10X) 1ml
D7076-3 EDTA(25mM) 1ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      如需对酶进行稀释,可以用酶储存液(50mM Tris-acetate(pH 7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol)进行稀释。
      酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. RT-PCR反应前RNA样品中DNA的去除:
a. DNA模板限制性核酸内切酶作用后线性化。酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量的无菌去离子水中。
b. 向一无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂:

RNA 1μg
Reaction Buffer (10X) 1μl
补充经DEPC处理的去离子水 至9μl
DNase I(1U/μl) 1μl

注意:如需处理较大量的RNA样品,可以按照比例放大上述反应体系。如果能在上述反应体系中加入适量Ribonuclease inhibitor以防止RNA降解则更佳。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 向上述反应体系中加入1μl 25mM EDTA,65℃孵育10分钟以失活DNase I。注意:在没有鏊合剂如EDTA等存在情况下加热,RNA可被水解。
e. 上述加热处理过的RNA样品即可直接用于处理好的RNA可用作RT-PCR反应的模板。
2. 体外RNA反转录后模板DNA的去除:
a. 在每含有0.5μg模板DNA的反转录反应体系中加入1U DNase I。注意:在某些情况下,模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通过实验进行摸索。
b. 37℃ 孵育15分钟。
c. 酚/氯仿抽提失活DNase I。
3. 缺口平移进行DNA标记:
a. 参考下表格设置反应体系:

Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I 2.5μl
3 dNTP Mixture (1mM each, without the labeled dNTP) * 1.25μl
[α-32P]-dNTP, ~110TBq/mmol (3000Ci/mmol) 1.85-3.7MBq (50-100μCi)
DNase I (freshly diluted to 0.002U/μl)** 1μl
DNA Polymerase I, E.coli 0. 5-1.5μl (5-15U)
Template DNA 0.25μg
补充无核酸酶去离子水 至25μl

*  3 dNTP Mixture(1mM each, without the labeled dNTP):分别取除已经标记的dNTP外的3种dNTP(100mM)各1μl加入到97μl 的无核酸酶的去离子水中混匀即可。例如标记的为dATP,则需混合dTTP、dCTP和dGTP三种dNTP至每种的最终浓度为1mM。配制好的dNTP可存放于-20℃以备后续使用。
** DNase I可以用1X Reaction Buffer for DNA Polymerase I进行稀释。
Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I:500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),100mM MgCl2,10mM DTT。
b. 立即15℃孵育15~60分钟。
c. 上述反应体系中加入1μl of 0.5M EDTA(pH 8.0)终止反应。
d. 从中取出少量例如1μl检测标记效率。通常标记效率至少可以达到108cpm/μg DNA。
e. 可用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60去除[α-32P]-dNTP,以纯化获得标记的DNA。
4. 其它用途可以参考上述用途进行。


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使用本产品的文献:
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CRISPR/Cas9 produces anti-hepatitis B virus effect in hepatoma cells and transgenic mouse.
Virus Res.2016 Jun 2;217:125-32.
2. Zhu G, Chen J, Tian J, Ge L, Xing A, Tang G.
Expression of NLRC4 in children with septicaemia and mechanisms of NLRC4 in in vitro cytokine secretion.
Mol Med Rep. 2016 Jul;14(1):509-14.
3.Sun XY, Duan ZJ, Liu Z, Tang SX, Li Y, He SC, Wang QM, Chang QY.
Inhibition of P-glycoprotein, multidrug resistance-associated protein 2 and cytochrome P450 3A4 improvesthe oral absorption of octreotide in rats with portal hypertension.
Exp Ther Med. 2016 Dec;12(6):3716-3722.
4. Wang H, Wu J.
17β-estradiol suppresses hyperoxia-induced apoptosis of oligodendrocytes through paired-immunoglobulin-like receptor B.
Mol Med Rep.2016 Mar;13(3):2892-8.
5. Hui H, Rao W, Zhang L, Xie Z, Peng C, Su N, Wang K, Wang L, Luo P, Hao YL, Zhang S, Fei Z.
Inhibition of Na(+)-K(+)-2Cl(-) Cotransporter-1 attenuates traumatic brain injury-induced neuronalapoptosis via regulation of Erk signaling.
Neurochem Int.2016 Mar;94:23-31.
6. Yang S, Li SS, Yang XM, Yin DH, Wang L.
Embelin prevents LMP1-induced TRAIL resistance via inhibition of XIAP in nasopharyngeal carcinoma cells.
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7. Feng Q, Hu ZY, Liu XQ, Zhang X, Lan X, Geng YQ, Chen XM, He JL, Wang YX, Ding YB.
Stomatin-like protein 2 is involved in endometrial stromal cell proliferation and differentiation duringdecidualization in mice and humans.
Reprod Biomed Online. 2016 Nov 23. pii: S1472-6483(16)30614-9.
8. Qiao C, Liu J, Yang J, Li Y, Weng J, Shao Y, Zhang X.
Enhanced non-inflammasome mediated immune responses by mannosylated zwitterionic-based cationicliposomes for HIV DNA vaccines.
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