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DNase I
产品编号: D7076
产品包装: 1000U
产品价格: 473.00元
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D7076 DNase I 1000U 473.00元

      DNase I,即Deoxyribonuclease I,中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物,5'端为磷酸基团,3'端为羟基。
      DNase I活性依赖于钙离子,并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。
      特点:不含RNase(RNase free),可以用于各种RNA样品的处理。提供了用于DNase I失活所需的EDTA。
      用途:制备不含DNA的RNA样品;RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA转录后去除DNA模板; DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用;缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片段文库;细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
      来源:从牛胰腺纯化得到。
      分子量:约32kDa(单体)。
      活性定义:37℃10分钟内,将能够完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量定义为1个活性单位。
      活性检测条件:40mM Tris-HCl(pH8.0),10mM MgSO4,1mM CaCl2,1μg of pBR322 DNA。
      纯度:不含其它DNA内切酶和外切酶,不含RNA酶。
      酶储存溶液:50mM Tris-acetate(pH7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol。
      Reaction Buffer(10X):100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),25mM MgCl2,1mM CaCl2
      失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10分钟可使DNase I失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的SDS,DTT、巯基乙醇等还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNase I有显著抑制作用。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7076-1 DNase I,RNase-free(50U/μl) 1000U
D7076-2 Reaction Buffer(10X) 1ml
D7076-3 EDTA(25mM) 1ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      如需对酶进行稀释,可以用酶储存液(50mM Tris-acetate(pH 7.5),10mM CaCl2,50%(v/v)glycerol)进行稀释。
      酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. RT-PCR反应前RNA样品中DNA的去除:
a. DNA模板限制性核酸内切酶作用后线性化。酚/氯仿和氯仿/异丙醇提取DNA,用乙醇沉淀后,溶于适量的无菌去离子水中。
b. 向一无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂:

RNA 1μg
Reaction Buffer (10X) 1μl
补充经DEPC处理的去离子水 至9μl
DNase I(1U/μl) 1μl

注意:如需处理较大量的RNA样品,可以按照比例放大上述反应体系。如果能在上述反应体系中加入适量Ribonuclease inhibitor以防止RNA降解则更佳。
c. 37℃孵育30分钟。
d. 向上述反应体系中加入1μl 25mM EDTA,65℃孵育10分钟以失活DNase I。注意:在没有鏊合剂如EDTA等存在情况下加热,RNA可被水解。
e. 上述加热处理过的RNA样品即可直接用于处理好的RNA可用作RT-PCR反应的模板。
2. 体外RNA反转录后模板DNA的去除:
a. 在每含有0.5μg模板DNA的反转录反应体系中加入1U DNase I。注意:在某些情况下,模板DNA完全消化所需的DNase I的量需通过实验进行摸索。
b. 37℃ 孵育15分钟。
c. 酚/氯仿抽提失活DNase I。
3. 缺口平移进行DNA标记:
a. 参考下表格设置反应体系:

Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I 2.5μl
3 dNTP Mixture (1mM each, without the labeled dNTP) * 1.25μl
[α-32P]-dNTP, ~110TBq/mmol (3000Ci/mmol) 1.85-3.7MBq (50-100μCi)
DNase I (freshly diluted to 0.002U/μl)** 1μl
DNA Polymerase I, E.coli 0. 5-1.5μl (5-15U)
Template DNA 0.25μg
补充无核酸酶去离子水 至25μl

*  3 dNTP Mixture(1mM each, without the labeled dNTP):分别取除已经标记的dNTP外的3种dNTP(100mM)各1μl加入到97μl 的无核酸酶的去离子水中混匀即可。例如标记的为dATP,则需混合dTTP、dCTP和dGTP三种dNTP至每种的最终浓度为1mM。配制好的dNTP可存放于-20℃以备后续使用。
** DNase I可以用1X Reaction Buffer for DNA Polymerase I进行稀释。
Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I:500mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃),100mM MgCl2,10mM DTT。
b. 立即15℃孵育15~60分钟。
c. 上述反应体系中加入1μl of 0.5M EDTA(pH 8.0)终止反应。
d. 从中取出少量例如1μl检测标记效率。通常标记效率至少可以达到108cpm/μg DNA。
e. 可用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60去除[α-32P]-dNTP,以纯化获得标记的DNA。
4. 其它用途可以参考上述用途进行。


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使用本产品的文献:
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