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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
产品编号: D6635M
产品包装:10kU
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价格: ¥ 628.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D6635S SmaI 2kU 158.00元
D6635M SmaI 10kU 628.00元
D6635L SmaI 40kU 1998.00元
D6635XL SmaI 200kU 7998.00元

碧云天自主研发生产的SmaI,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶[1],其基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
CCC^GGG
GGG^CCC
1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 37ºC 65ºC
20min
有时有干扰
0-20 0-20 0-20 0-20 100 0-20

根据识别序列邻近序列的不同,酶切效果受CG methylase导致的DNA甲基化的影响。

碧云天生产的SmaI酶切DNA双链的效果请参考图1。

图1. 碧云天生产的SmaI (D6635)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外N公司的SmaI,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的SmaI,在1X Buffer Y中酶切含一个SmaI位点的300bp的DNA片段,37ºC孵育30分钟进行酶切反应,酶切产物为两个长度相等的150bp片段,65ºC孵育20分钟进行失活,然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

酶储存液组成为:10mM Tris-HCl (pH7.4 at 25ºC), 300mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 0.5mg/ml BSA, 50% Glycerol。

1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate (pH7.9 at 37ºC), 10mM Magnesium acetate, 66mM Potassium acetate, 0.1mg/ml BSA。

酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>90%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of SmaI required to digest 1µg of λDNA in 1 hour at 37ºC in a total reaction volume of 50µl.

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6635S-1 SmaI (20U/µl) 100μl
D6010Y-0.4ml 10X Buffer Y 0.4ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6635M-1 SmaI (20U/µl) 500μl
D6010Y-2ml 10X Buffer Y 2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6635L-1 SmaI (20U/µl) 2ml
D6010Y-8ml 10X Buffer Y 8ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6635XL-1 SmaI (100U/µl) 2ml
D6010Y-40ml 10X Buffer Y 40ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 单酶切时可以参考如下反应体系进行:
Reagent Volume
DNA Substrate xµl (≤1µg)
Ultrapure water (18-x-y)µl
10X Buffer Y 2µl
SmaI (20U/μl) yµl (0.5-1µl)
Total volume 20µl
Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight
注:请把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2. 双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
参考文献:
1. Withers BE, Dunbar JC. Nucleic Acids Res. 1993. 21(11):2571-7.
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产品编号 产品名称 包装
D5601-200μl BeyoFast™ ApaLI 200μl
D5609-50μl BeyoFast™ AscI 50μl
D5617-25μl BeyoFast™ AvrII 25μl
D5625-500μl BeyoFast™ BamHI 500μl
D5633-125μl BeyoFast™ BclI 125μl
D5641-100μl BeyoFast™ BglII 100μl
D5649-50μl BeyoFast™ BsaI 50μl
D5653-20μl BeyoFast™ BspQI 20μl
D5657-100μl BeyoFast™ BstBI 100μl
D5665-100μl BeyoFast™ BstEII 100μl
D5673-50μl BeyoFast™ ClaI 50μl
D5681-50μl BeyoFast™ DpnI 50μl
D5689-50μl BeyoFast™ DpnII 50μl
D5692-200μl BeyoFast™ DraI 200μl
D5697-25μl BeyoFast™ EagI 25μl
D5705-600μl BeyoFast™ EcoRI 600μl
D5713-200μl BeyoFast™ EcoRV 200μl
D5721-30μl BeyoFast™ Esp3I (BsmBI ) 30μl
D5729-50μl BeyoFast™ FspI 50μl
D5737-500μl BeyoFast™ HindIII 500μl
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D5753-50μl BeyoFast™ HpaI 50μl
D5761-30μl BeyoFast™ KasI 30μl
D5769-200μl BeyoFast™ KpnI 200μl
D5777-100μl BeyoFast™ MluI 100μl
D5785-50μl BeyoFast™ MnlI 50μl
D5789-200μl BeyoFast™ MspI 200μl
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D5945-200μl BeyoFast™ TaqI 200μl
D5953-500μl BeyoFast™ XbaI 500μl
D5958-50μl BeyoFast™ XcmI 50μl
D5961-500μl BeyoFast™ XhoI 500μl
D6055S/M/L/XL BamHI 10kU/40kU/200kU/800kU
D6128S/M/L/XL BsaI 1kU/5kU/20kU/200kU
D6132S/M/L/XL BspQI 400U/2kU/10kU/40kU
D6257S/M/L/XL DpnI 500U/2.5KU/10KU/50KU
D6272S/M/L DraI 4kU/20kU/100kU
D6333S/M/L/XL EcoRI 10kU/40kU/200kU/800kU
D6339S/M/L/XL EcoRV 4kU/20kU/100kU/400kU
D6392S/M/L/XL HindIII 10kU/40kU/200kU/1000kU
D6418S/M KpnI 4kU/20kU
D6470S/M/L/XL MspI 4kU/20kU/100kU/500kU
D6482S/M/L/XL NcoI 800U/4kU/20kU/100kU
D6486S/M/L NdeI 4kU/20kU/100kU
D6498S/M/L/XL NotI 1kU/4kU/20kU/100kU
D6542S/M/L/XL PmeI 800U/4kU/20kU/100kU
D6590S/M/L/XL SapI 400U/2kU/10kU/40kU
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