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核酸相关> DNA操作> 内切酶与外切酶
产品编号: D6542L
产品包装:20kU
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价格: ¥ 2498.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D6542S PmeI 800U 158.00元
D6542M PmeI 4kU 628.00元
D6542L PmeI 20kU 2498.00元
D6542XL PmeI 100kU 9998.00元

碧云天自主研发生产的PmeI,是从大肠杆菌表达纯化获得的一种限制性内切酶,是MssI的同裂酶(Isoschizomers),其基本信息如下:

识别序列 缓冲液兼容性(%) 酶切温度 失活条件 甲基化干扰?
GTTT^AAAC 1X B 1X G 1X O 1X R 1X Y 2X Y 37ºC 65ºC 20min 有时有干扰
CAAA^TTTG 0-20 20-50 0-20 20-50 100 50-100

碧云天生产的PmeI酶切DNA双链的效果请参考图1。

图1.碧云天生产的PmeI (D6542)和国外同类产品(Competitor)的酶活性检测效果对比图。使用本产品或国外N公司的PmeI,在20µl反应体系中加入图中指定量的本产品或国外N公司的PmeI,在1X Buffer Y中酶切含一个PmeI位点的300bp的DNA片段,37ºC孵育1小时进行酶切反应,酶切产物为两个长度相等的150bp片段,随后65ºC孵育20分钟使酶失活,然后电泳并进行核酸染色和荧光成像分析。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的酶切效果。M, DNA marker (DNA Ladder (0.2-12kb, 12 bands) (D0110))。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

酶储存液组成为:10mM Tris-HCl (pH7.4 @ 25ºC), 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 200µg/ml BSA, 50% Glycerol。

1X Buffer Y组成为:33mM Tris-acetate (pH7.9 @ 37ºC), 10mM Magnesium acetate, 66mM Potassium acetate, 0.1mg/ml BSA。

酶切和连接效率:50倍过量的本内切酶消化1小时,>95%被酶切的片段可以被连接并被重新酶切(Recut)。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of PmeI required to digest 1µg of λDNA in 1 hour at 37ºC in a total reaction volume of 50µl。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D6542S-1 PmeI (20U/µl) 40μl
D6010Y-160µl 10X Buffer Y 160μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6542M-1 PmeI (20U/µl) 200μl
D6010Y-800µl 10X Buffer Y 800μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6542L-1 PmeI (20U/µl) 1ml
D6010Y-4ml 10X Buffer Y 4ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
D6542XL-1 PmeI (100U/µl) 1ml
D6010Y-20ml 10X Buffer Y 20ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

内切酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐选购BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

如果发现预期的酶切位点不能切开,请确认是否存在甲基化干扰问题。

特别注意:甘油含量大于5%,低盐浓度,pH >8.0或酶超量(约20倍以上)可能会导致星号活性,即产生非特异性酶切。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.单酶切时可以参考如下反应体系进行:
Reagent Volume
DNA Substrate xµl (≤1µg)
Ultrapure water (18-x-y)µl
10X Buffer Y 2µl
PmeI (20U/µl) yµl (0.5-1µl)
Total volume 20µl
Incubate at 37ºC for 1h, 2-6h or overnight
注:请把Buffer和水等充分混匀后再加入内切酶,加入内切酶后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。通常参考上述条件孵育1小时已经足够,但多孵育数小时甚至孵育过夜也不会产生负面影响。如果酶切较长时间甚至酶切过夜,可以使用更少量的酶。待酶切DNA量较大时,可以适当延长酶切时间或按比例放大酶切体系。
2.双酶切或多酶切时,需选择适当的可以兼容两个或多个内切酶的缓冲液,然后参考上表设置反应体系。如果没有合适的缓冲液可以选择,可以在一种酶消化完毕后进行纯化,纯化完毕后再进行另外一种酶切反应。
参考文献:
1.Zhiyuh Chang, Richard D. Morgan. Method for cloning and producing the PmeI restriction endonuclease. USOO5945288A [P]. 1999.
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