使用说明：
1. 使用Recombinant TET2将5-甲基胞嘧啶(5-mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)。
a. 含5-甲基胞嘧啶(5-mC)的30bp双链DNA的制备.使用碧云天Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) (
D0251)使两条互补的单链DNA (中间含有一个或多个5-甲基胞嘧啶(5-mC))退火形成含5-甲基胞嘧啶(5-mC)残基的双链DNA。
b. Recombinant TET2催化5-甲基胞嘧啶(5-mC)转化为5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)的反应。
a) 参考下表在冰浴中配制反应体系。
| Reagent |
Volume |
Final concentration |
| BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876) |
up to 20μl |
- |
| 10X TET2 Buffer I |
2μl |
1X |
| 10X TET2 Buffer II |
2μl |
1X |
| 10X TET2 Buffer III |
2μl |
1X |
| dsDNA with 5mC (20μM, 0.37μg/μl) |
2.7μl |
50ng/μl |
| Recombinant TET2 (0.25μg/μl) |
1μl |
12.5ng/μl |
| Total Volume |
20μl |
- |
注：按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后低速离心沉淀液体。如果同时进行多个反应，可以把上表中除dsDNA之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入dsDNA。
b) 反应条件：37ºC孵育60分钟。
c) 终止反应：反应结束后加入蛋白酶K或酚氯仿抽提可终止反应。
2. EM-seq：使用Recombinant APOBEC3A (A3A) (D6751)、Recombinant Ten-Eleven Translocase 2 (TET2)和T4 Phage β-glucosyltransferase (T4-BGT) (D6755)进行酶法甲基化测序请参考相关文献进行[2]。
3. 其它应用请参考相关文献进行。
参考文献：
1. Ravichandran M, Rafalski D, Davies CI, Ortega-Recalde O, Nan X, et al. Sci Adv. 2022. 8(36):eabm2427.
2. Vaisvila R, Ponnaluri VKC, Sun Z, Langhorst BW, Saleh L, et al. Genome Res. 2021. 31(7):1280-1289.
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| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
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DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒 |
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| D0069 |
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96次/4×96次 |
| D0251 |
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) |
1ml |
| D6751 |
Recombinant APOBEC3A (A3A) |
25μg/100μg/500μg |
| D6753 |
Recombinant Ten-Eleven Translocase 2 (TET2) |
10μg/50μg |
| D6755 |
T4 Phage β-glucosyltransferase (T4-BGT) |
500U/2500U |
| P0018A |
BeyoECL Star (特超敏ECL化学发光试剂盒) |
100ml/500ml |
| ST876 |
BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) |
100ml/500ml |