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核酸相关> DNA操作> 重组与克隆
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
产品编号: D0251
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D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 1ml 89.00元

碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),即DNA寡核苷酸退火缓冲液,是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火,而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,极易自身形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本试剂盒操作非常简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后,置于PCR仪上,约90分钟即可完成。
如果一次退火反应体积为100微升,一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 1ml
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 只适合于DNA oligo的退火,不能用于RNA oligo 的退火。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的Milli-Q水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:

Nuclease-Free Water 40μl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 20μl
DNA oligo A (50μM) 20μl
DNA oligo B (50μM) 20μl
总体积 100μl

按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的PCR仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应:

步骤 温度 时间 说明
1 95℃ 2分钟 让oligo充分变性
2 每8秒下降0.1℃,降至25℃(注1) 约90分钟 退火
3 4℃ 长时间保持 暂时存放

注1:每8秒下降0.1℃,降至25℃的程序设置,以Bio-Rad的T100为例为:1. 95℃, 2:00; 2. 95º, 0.08, -0.1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 700X; 4. 4℃, ∞。
注2:如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每90秒下降1℃。程序设置以Bio-Rad的T100为例为:1. 95℃, 2:00; 2. 95℃, 1:30, -1℃ per cycle; 3. GOTO step 2, 70X; 4. 4℃, ∞。
注3:如果条件有限,也可以将水浴锅加热至95℃,把PCR管放在水浴锅中,或者把煮沸的热水加入到保温杯或保温瓶中,待水温降到95℃时放入PCR管。所用水量控制在1-2小时内自然降温至25℃左右。此方法的退火效果可能会比使用PCR仪略差一些。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以在-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。

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