使用说明：
1. HCT116细胞的运输、复苏及培养：
a. 本HCT116 Cells为同时表目的基因sgRNA、Cas9、EGFP标签和hygromycin抗性的慢病毒感染并经过hygromycin筛选和T7EI鉴定的多克隆HCT116细胞。
b. 本细胞会根据细胞是否正在培养、目的地距离等因素确定运输方式：冷冻的细胞冻存管(干冰)、一小瓶贴壁培养的细胞或一小瓶/管悬浮培养的细胞(常温)。为了更好地耐受长途运输和环境温度等变化，对于正常贴壁培养的细胞，也可能会以悬浮的形式培养在细胞培养瓶或离心管中进行运输。
c. 对于干冰运输的冻存细胞，若干冰已经完全融化，请立即将细胞复苏培养，切勿再次低温冻存；若尚留有干冰，请直接复苏培养或立即将含有细胞的冻存管放入液氮中保存待用，切不可将细胞置于高温环境。
d. 收到冻存的细胞后请尽快复苏细胞进行培养，以确认细胞活力、状态并保种。如暂时不进行复苏操作，冻存细胞可在-80ºC条件下保存2个月。
e. 每支冻存管约含1×10
6个细胞，体积为0.5-1ml，预期存活率60-90%，建议复苏至1个6cm培养皿中。如果复苏后存活率较低，可以消化后转移至3.5cm培养皿中，这样细胞生长会更好。
f. 如果本细胞是常温运输，并且是培养瓶中充满完全培养液的贴壁细胞，收到细胞后请在显微镜下观察细胞生长状态，如果细胞密度超过85%请尽快进行传代操作；如果悬浮的细胞较多，请将培养瓶置于培养箱中静置过夜以使悬浮的细胞再次贴壁。如果收到的是常温运输的离心管装的悬浮细胞，可以直接取出转移至培养皿或培养瓶中培养。若培养液颜色正常则保留培养液继续培养，并且在首次更换培养液时，保留一半原培养液，并加入一半新鲜培养液，这样可以尽量避免由于培养液或血清差异导致细胞生长的不适应，确保细胞良好的生长状态。
g. 本细胞的培养液为McCoy's 5A+10% FBS。请在培养液中加入适量青霉素-链霉素溶液以防止可能的细菌污染，如碧云天的青霉素-链霉素溶液(100X) (
C0222)。未感染慢病毒的HCT116细胞的具体信息请参考HCT116 (人结肠癌细胞) (C6309)：
https://www.beyotime.com/product/C6309.htm。
h. 如果有必要，后续可以通过将细胞稀释至2.5个/ml，然后按照每孔200µl接种到96孔板中(每孔平均0.5个细胞)，筛选单克隆细胞株，或委托碧云天进行单克隆细胞株的筛选服务。
2. 基因编辑的鉴定：
a. 对于多克隆细胞，可以通过T7 Endonuclease I (T7EI)进行鉴定，即提取细胞的基因组DNA，在sgRNA序列两侧设计引物进行PCR扩增，然后进行T7EI酶切和电泳分析，具体请参考碧云天的基因组编辑突变检测试剂盒(
D0508)：
https://www.beyotime.com/product/D0508S.htm，或T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) (
D7080)；也可以通过目的基因的抗体进行检测。注意：由于CRISPR基因敲除通常是仅若干个碱基的缺失突变，不适合通过qRT-PCR对目的基因的mRNA进行定量检测来判断是否实现了目的基因的敲除。
b. 对于单克隆细胞，可通过PCR扩增出sgRNA靶向的基因片段后进行常规测序的方式进行验证，同时也可以使用相应的抗体进行检测。本产品也可以通过进一步筛选单克隆细胞株后进行基因编辑的鉴定以及后续的生物学功能研究。
相关产品：
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| C0222 |
青霉素-链霉素溶液(100X) |
100ml |
| D0508 |
基因组编辑突变检测试剂盒 |
25/100次 |
| D7080 |
T7 Endonuclease I (CRISPR等基因突变鉴定用) |
250/1250/5000U |
| C90203 |
DNMT1基因敲除HCT116细胞(EGFP) |
1支/瓶 |
| C90213 |
DNMT3A基因敲除HCT116细胞(EGFP) |
1支/瓶 |
| C90223 |
DNMT3B基因敲除HCT116细胞(EGFP) |
1支/瓶 |
| C90233 |
无任何靶向基因敲除HCT116细胞(EGFP) |
1支/瓶 |
| C90238 |
无任何靶向基因敲除HCT116细胞(mCherry) |
1支/瓶 |
| ST1389 |
Hygromycin B (潮霉素B) |
50mg/250mg/1g/5g |
| ST551-10mg |
Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) |
10mg/ml×1ml |
| ST551-50mg |
Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) |
10mg/ml×5ml |
| ST551-250mg |
Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素) |
250mg |