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核酸相关> 菌种与质粒> 真核载体
pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒)
产品编号: D2802
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D2802 pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) 1μg 888.00元

pFastBac1-EGFP是以pFastBac1为基础构建的用于在昆虫细胞表达EGFP的质粒。在polyhedrin (PH)启动子的作用下,可以高效启动EGFP在昆虫细胞(如Sf9和Sf21等)中的表达。
在采用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达目的蛋白时,pFastBac1-EGFP可以用作监测转染、病毒包装和目的蛋白表达效果的对照质粒。表达的EGFP有很强的绿色荧光,在荧光显微镜下可以非常方便地观察转染、病毒包装和表达的效果。
pFastBac1是基于Bac-to-Bac杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而设计的表达载体。Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是由Luckow等人于1993年发展的一种快速而有效产生重组杆状病毒的方法。该系统主要包括以下两个组分:(1)用于插入目的基因的pFastBac载体,目的基因如EGFP等插入后受杆状病毒特异性启动子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin启动子调控表达;(2)含杆状病毒穿梭载体bacmid (bMON14272, 136kb)和辅助质粒(helper plasmid,用于表达转座必须的转座蛋白)的大肠杆菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。将pfastBac重组质粒转化该菌株可发生pfastBac重组质粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7发生转座,从而形成重组的bacmid。位点特异的转座会破坏宿主的lacZα基因,从而可通过蓝白斑筛选重组克隆。PCR等方法鉴定重组克隆后,提取重组的bacmid转染昆虫细胞,可以产生重组杆状病毒,并表达目的蛋白如EGFP等。扩增重组的杆状病毒并感染昆虫细胞,就可以大量表达纯化目的蛋白了。
pFastBac1-EGFP质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 2-457
Ampicillin resistance gene 589-1449
pUC origin 1594-2267
Tn 7R 2511-2735
Gentamicin resistance gene 2802-3335
Polyhedrin promoter (PPH) 3904-4032
EGFP 4038-4757
SV40 polyadenylation signal 4794-5021
Tn 7L 5050-5215

pFastBac1-EGFP质粒(5397bp)的图谱如下:

pFastBac1-EGFP质粒的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2802 pFastBac1-EGFP.pdf

pFastBac1-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括:

AatII Acc65I AfeI AflII AgeI ApaI AscI
AsiSI BbvCI BfuAI BlpI BmgBI BmtI BsiWI
BspDI BspMI BssHII BstAPI BstBI BstEII Bsu36I
ClaI CspCI Eco53kI EcoNI EcoO109I EcoRI FseI
KasI KpnI MluI NarI NdeI NheI NotI
NruI NsiI PacI PaeR7I PflMI PluTI PmeI
PmlI PpuMI PshAI PspOMI PspXI PstI PvuII
RsrII SacI SalI SbfI SexAI SfiI SfoI
SgrAI SmaI SpeI SphI SrfI StuI SwaI
TspMI XbaI XcmI XhoI XmaI ZraI

      pFastBac1-EGFP中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括:

NgoMIV G`CCGG,C 127 BsmBI CGTCTCN`NNNN, 3182
NaeI GCC|GGC 129 PflFI GACN`N,NGTC 3228
BanII G,RGCY`C 157 Tth111I GACN`N,NGTC 3228
BsaHI GR`CG,YC 836 BbsI GAAGACNN`NNNN, 3757
PvuI CG,AT`CG 1005 SnaBI TAC|GTA 3881
FspI TGC|GCA 1153 AccI GT`MK,AC 3883
AlwNI CAG,NNN`CTG 1852 BstZ17I GTA|TAC 3884
BseYI C`CCAG,C 1960 BsmFI GGGAC(N)10`NNNN, 4000
TfiI G`AWT,C 2290 BamHI G`GATC,C 4032
SapI GCTCTTCN`NNN, 2381 NcoI C`CATG,G 4036
BspQI GCTCTTCN`NNN, 2381 HindIII A`AGCT,T 4758
MscI TGG|CCA 2709 MfeI C`AATT,G 4873
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 2713 HpaI GTT|AAC 4886
SacII CC,GC`GG 2766 BclI T`GATC, 5022
BaeI ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` 2798 AvrII C`CTAG,G 5037
EcoRV GAT,ATC 2825

pFastBac1-EGFP的全序列信息请参考碧云天的网站上该质粒的信息。
pFastBac1-EGFP质粒使用碧云天研发的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞的效果参考图1。

图1. pFastBac1-EGFP质粒转化DH10Bac,获得的重组bacmid用碧云天生产的LipoInsect™转染试剂(C0551)转染SF9细胞4天后的效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

关于昆虫细胞系统的蛋白表达与纯化的详细介绍,请见如下网页: http://www.beyotime.com/support/insect cell.htm
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2802 pFastBac1-EGFP (杆状病毒包装阳性对照质粒) 1μg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒通常用于转化大肠杆菌DH10Bac用于制备重组bacmid。

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