p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa) (for BiFC)是一种碧云天研发的植物表达质粒，可用于表达目的蛋白与HA标签及两个YFP (156-239aa)的融合蛋白，并用于双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC)实验。

双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC)是一种直观、快速可视地判断目的蛋白在活细胞中的定位和相互作用的技术，通常与酵母双杂、Co-IP、Pull-down等实验结果相互验证，具有灵敏度高和实验周期短等的优点。BiFC利用荧光蛋白两个β片层间的环状结构上有多个特异性位点可插入外源蛋白却不影响其荧光活性的特性，将荧光蛋白切割成两个没有荧光活性的分子片段，然后将两个荧光蛋白片段分别与待研究的两个目的蛋白融合表达。当两个目的蛋白发生相互作用时，两个不完整的非荧光片段重新结合或空间上相互靠近，就会重新形成完整的具有活性的荧光蛋白，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若蛋白没有相互作用，则不能被激发出荧光[1]。

本质粒含有CMV 35S启动子，可以高效启动目的蛋白在植物细胞中的表达，在多克隆位点根据阅读框插入目的基因A就可以实现其与HA标签及两个YFP (156-239aa)的融合表达，在含两个YFP (1-155aa)的质粒(D2685)的多克隆区插入目的基因B则可实现它们的融合表达。将这两个表达质粒一起共转化植物原生质体，可用于验证目的蛋白A和B的相互作用关系及相互作用的位置[1]；当A和B蛋白发生相互作用时，可以观察到增强的黄色的YFP荧光信号；当A和B蛋白没有发生相互作用时，则观察不到荧光。将目标蛋白串联两个YFP分裂片段可以提高荧光互补效率，增强荧光信号[2]。

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)质粒含植物瞬时转染所需元件，不可用于植物稳定遗传株系的构建。

本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。可利用其氨苄青霉素抗性，转化大肠杆菌后筛选阳性克隆。

碧云天研发了多对用于BiFC实验的质粒(D2677和D2679、D2681和D2683、D2685和D2687、D2689和D2691、D2693和D2695、D2697和D2699)，可按实验需求选择其中一对或组合(如D2677与D2679/D2683/D2695/D2699，D2679与D2677/D2681/D2693/ D2697)，只需简单地将待验证的外源目的基因分别构建到含N段YFP和C段YFP的融合表达质粒上，搭配碧云天的植物原生质体制备与转化试剂盒(C0360)，或者搭配碧云天的植物原生质体分离试剂盒(C0362)与植物原生质体转染试剂盒(C0563)使用，即可快速完成从载体构建到荧光检测，并确认蛋白与蛋白相互作用的实验过程。

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)质粒(4403bp)的图谱如下：

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)质粒的主要信息如下：

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)的多克隆位点的详细图谱如下：https://www.beyotime.com/Manual/D2687 p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa) (for BiFC).pdf。

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)中没有的酶切位点包括：

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)中的单酶切位点包括：

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)质粒对于插入片段进行测序时，推荐使用p35S forward primer和tNOS reverse primer，它们的序列如下：

p35S forward primer (1087-1111): 5'-CGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3'

tNOS reverse primer (2023-2039): 5'-AAATGTATAATTGCGGG-3'

p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)的全序列信息：D2687 p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa) 质粒全序列.txt。

本质粒与p35S-C-Myc-YFP (1-155aa)-YFP (1-155aa)共转化拟南芥原生质体后的融合蛋白表达效果请参考图1。

图1.碧云天p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa) (for BiFC) (D2687)与p35S-C-Myc-YFP (1-155aa)-YFP (1-155aa) (for BiFC) (D2685)共转拟南芥原生质体后的融合蛋白表达效果图。在p35S-C-Myc-YFP (1-155aa)-YFP (1-155aa)与p35S-C-HA-YFP (156-239aa)-YFP (156-239aa)质粒上分别连接一对已知的有相互作用的叶绿体蛋白基因WRKY33和WRKY12作为目的基因，使用植物原生质体制备与转化试剂盒(C0360)制备拟南芥原生质体并共转各10μg重组质粒，转化完成后将样品平置25ºC弱光培养过夜(约16小时)，次日于荧光显微镜下检测YFP荧光信号。上图为实际检测的明场和荧光照片。实际的检测效果会因检测条件的不同而存在差异，本图仅供参考。

-20ºC保存。

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。