碧云天的HA&Myc标签BiFC阳性对照质粒对(Positive Control Plasmids Pair with HA and Myc Tags for BiFC)包含p35S-TP-PsbE-HA-YFP (156-239aa)和p35S-RBD1-Myc-YFP (1-155aa)两种质粒，可以用于在植物细胞中分别表达C端带有HA标签及YFP (156-239aa)的PsbE、和C端带有Myc标签及YFP (1-155aa)的RBD1融合蛋白。因为RBD1和PsbE蛋白间具有较强的相互作用，本质粒对可作为共转化植物原生质体细胞的双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC)实验的阳性对照使用。

双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation, BiFC)是一种直观、快速可视地判断目的蛋白在活细胞中的定位和相互作用的技术，通常与酵母双杂、Co-IP、Pull-down等实验结果相互验证，具有灵敏度高和实验周期短等的优点。BiFC利用荧光蛋白两个β片层间的环状结构上有多个特异性位点可插入外源蛋白却不影响其荧光活性的特性，将荧光蛋白切割成两个没有荧光活性的分子片段，然后将两个荧光蛋白片段分别与待研究的两个目的蛋白融合表达。当两个目的蛋白发生相互作用时，两个不完整的非荧光片段重新结合或空间上相互靠近，就会重新形成完整的具有活性的荧光蛋白，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若蛋白没有相互作用，则不能被激发出荧光[1]。

p35S-TP-PsbE-HA-YFP (156-239aa)质粒表达PsbE。拟南芥PsbE即光系统II反应中心蛋白E (Photosystem II reaction center protein E)，全长83氨基酸，分子量约为9.4kDa，是PSII的核心天线蛋白，与PsbF亚基共同组成PSII核心复合物细胞色素b559 (Cyt b559)。Cyt b559不仅对PSII的生物合成至关重要，还能通过PSII内的环式电子传递发挥光保护作用[2]。

p35S-RBD1-Myc-YFP (1-155aa)质粒表达RBD1。拟南芥的RBD1即红氧还蛋白1 (Rubredoxin 1)，全长195氨基酸，分子量约为21.8kDa，是一种叶绿体定位的类囊体膜蛋白。RBD1具有氧化还原活性的红氧还蛋白结构域和C端跨膜的α螺旋结构域，是一种叶绿体类囊体膜光合复合物PSII的组装因子，它与含Cyt b559的PSII中间复合物相互作用，确保PSII功能组装和修复，保护PSII免受光氧化[3-4]。

本质粒对均含有CMV 35S启动子，可以高效启动目的蛋白在植物细胞中的表达，并均带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。

本质粒对用于共转化拟南芥原生质体后融合蛋白表达的效果请参考图1。

图1.碧云天的HA&Myc标签BiFC阳性对照质粒对(D2675)用于共转拟南芥原生质体后融合蛋白表达的效果图。使用植物原生质体制备与转化试剂盒(C0360)制备拟南芥原生质体，并共转各10μg的p35S-TP-PsbE-HA-YFP (156-239aa)和p35S-RBD1-Myc-YFP (1-155aa)质粒，转化完成后将样品平置25ºC弱光培养过夜(约16小时)，次日于荧光显微镜下检测YFP荧光信号。上图为实际检测的明场和荧光照片。如图所示，拟南芥原生质体细胞的叶绿体具有强烈的YFP荧光信号，显示出现了预期的两个目标蛋白的相互作用。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

推荐使用的测序引物序列如下：

p35S-F primer: 5'-CGTCTTCAAAGCAAGTGGATTGATG-3'

tNOS-R primer: 5'-AAATGTATAATTGCGGG-3'

p35S-TP-PsbE-HA-YFP (156-239aa)和p35S-RBD1-Myc-YFP (1-155aa)的全序列信息：D2675-1 p35S-TP-PsbE-HA-YFP (156-239aa).txt 和 D2675-2 p35S-RBD1-Myc-YFP (1-155aa).txt。

-20ºC保存。

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。