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 pET-N-GST-Thrombin-C-His

  产品编号D2911
  产品包装: 1μg
  产品价格: 862.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His 1μg 862.00元

      pET-N-GST-Thrombin-C-His是一种用于表达N端含GST标签(Glutathione S-transferase tag, GST tag)或C端含His标签(His tag)的重组蛋白的原核表达质粒,也可用于表达N端含GST标签并且同时C端含His标签的重组蛋白。GST和His双标签有利于通过GST柱和镍柱两种方法来纯化目的蛋白,使目的蛋白的纯度更高。本质粒N端GST标签后有Thrombin酶切位点,可通过Thrombin蛋白酶切除N端的GST标签。本质粒为卡那霉素抗性。
      本质粒含有T7启动子/lac操纵子,可以在异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下高效启动目的蛋白表达。在多克隆位点的前面有一个GST标签的编码序列,后面有一个His标签的编码序列,后者含有6个组氨酸(6X His)。因此在多克隆位点根据读码框插入不含终止密码子的目的基因就可以表达N端含有GST标签并且C端含有His标签的目的蛋白。也可以在目的基因后面添加终止密码子,这样就可以表达仅在N端含有GST标签的目的蛋白。如果在NdeI和多克隆酶切位点之间按照读码框插入不带有终止密码子的目的基因,这样就可以表达仅C端带有His标签的目的蛋白。
      本载体在N端GST标签与多克隆位点之间含有Thrombin蛋白酶识别的6肽序列LVPRGS,对应的核酸序列为CTGGTTCCGCGTGGATCC,因此在目的蛋白纯化后可以利用Thrombin酶切除N端的GST标签。Thrombin蛋白酶酶切发生在六肽序列的R和G之间,因此在酶切去除GST标签的时候会在目的蛋白的N端留下两个额外的氨基酸残基GS。
      通常可以采用如BeyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)、GST标签蛋白纯化试剂盒(P2262)、BeyoGold™ His-tag Purification Resin (P2210/P2218/P2220)或His标签蛋白纯化试剂盒(P2226)等纯化本质粒表达的目的蛋白,也可以使用GST抗体(AG768/AF0174)和His-tag抗体(AH367)检测和少量地分离纯化目的蛋白。
      pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒(5955bp)的图谱如下:

      pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
f1 origin 12-467
Kanamycin resistance ORF 563-1645
PBR 322 origin 2084
LacI coding sequence 3518-4597
T7 promoter 4988-5004
GST tag coding sequence 5076-5732
Thrombin recognition site sequence 5739-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI) 5751-5798
His tag coding sequence 5799-5816
T7 Terminator 5884-5930

      pET-N-GST-Thrombin-C-His的多克隆位点的详细图谱如下:

XbaIrbsNdeI
5026  AATTCCCCTC    TAGAAATAAT    TTTGTTTAAC    TTTAAGAAGG    AGATATACAT
 TTAAGGGGAG    ATCTTTATTA    AAACAAATTG    AAATTCTTCC    TCTATATGTA
GSTtag
5076  ATGATGTCCC    CTATACTAGG    TTATTGGAAA    ATTAAGGGCC    TTGTGCAACC
 TACTACAGGG    GATATGATCC    AATAACCTTT    TAATTCCCGG    AACACGTTGG
5126  CACTCGACTT    CTTTTGGAAT    ATCTTGAAGA    AAAATATGAA    GAGCATTTGT
 GTGAGCTGAA    GAAAACCTTA    TAGAACTTCT    TTTTATACTT    CTCGTAAACA
5176  ATGAGCGCGA    TGAAGGTGAT    AAATGGCGAA    ACAAAAAGTT    TGAATTGGGT
 TACTCGCGCT    ACTTCCACTA    TTTACCGCTT    TGTTTTTCAA    ACTTAACCCA
5226  TTGGAGTTTC    CCAATCTTCC    TTATTATATT    GATGGTGATG    TTAAATTAAC
 AACCTCAAAG    GGTTAGAAGG    AATAATATAA    CTACCACTAC    AATTTAATTG
5276  ACAGTCTATG    GCCATCATAC    GTTATATAGC    TGACAAGCAC    AACATGTTGG
 TGTCAGATAC    CGGTAGTATG    CAATATATCG    ACTGTTCGTG    TTGTACAACC
5326  GTGGTTGTCC    AAAAGAGCGT    GCAGAGATTT    CAATGCTTGA    AGGAGCGGTT
 CACCAACAGG    TTTTCTCGCA    CGTCTCTAAA    GTTACGAACT    TCCTCGCCAA
5376  TTGGATATTA    GATACGGTGT    TTCGAGAATT    GCATATAGTA    AAGACTTTGA
 AACCTATAAT    CTATGCCACA    AAGCTCTTAA    CGTATATCAT    TTCTGAAACT
5426  AACTCTCAAA    GTTGATTTTC    TTAGCAAGCT    ACCTGAAATG    CTGAAAATGT
 TTGAGAGTTT    CAACTAAAAG    AATCGTTCGA    TGGACTTTAC    GACTTTTACA
5476  TCGAAGATCG    TTTATGTCAT    AAAACATATT    TAAATGGTGA    TCATGTAACC
 AGCTTCTAGC    AAATACAGTA    TTTTGTATAA    ATTTACCACT    AGTACATTGG
5526  CATCCTGACT    TCATGTTGTA    TGACGCTCTT    GATGTTGTTT    TATACATGGA
 GTAGGACTGA    AGTACAACAT    ACTGCGAGAA    CTACAACAAA    ATATGTACCT
5576  CCCAATGTGC    CTGGATGCGT    TCCCAAAATT    AGTTTGTTTT    AAAAAACGTA
 GGGTTACACG    GACCTACGCA    AGGGTTTTAA    TCAAACAAAA    TTTTTTGCAT
5626  TTGAAGCTAT    CCCACAAATT    GATAAGTACT    TGAAATCCAG    CAAGTATATA
 AACTTCGATA    GGGTGTTTAA    CTATTCATGA    ACTTTAGGTC    GTTCATATAT
5676  GCATGGCCTT    TGCAGGGCTG    GCAAGCCACG    TTTGGTGGTG    GCGACCATCC
 CGTACCGGAA    ACGTCCCGAC    CGTTCGGTGC    AAACCACCAC    CGCTGGTAGG
ThrombinPstI
BamHI
HindIIIEcoRIEcoRV
5726  TCCAAAATCG    GATCTGGTTC    CGCGTGGATC    CAAGCTTCTG    CAGGAATTCG
 AGGTTTTAGC    CTAGACCAAG    GCGCACCTAG    GTTCGAAGAC    GTCCTTAAGC
SalIBglIIXhoIHistag
5776  ATATCGTCGA    CAGATCTCTC    GAGCACCACC    ACCACCACCA    CTGAGATCCG
 TATAGCAGCT    GTCTAGAGAG    CTCGTGGTGG    TGGTGGTGGT    GACTCTAGGC

      pET-N-GST-Thrombin-C-His中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-Thrombin-C-His)包括:

AatII Acc65I AflII AgeI AhdI AleI AscI
AvrII BaeI BbvCI BfuAI BmgBI BmtI BsaI
BseRI BsiWI BspMI BsrGI Bsu36I CspCI EagI
Eco53kI FseI KpnI MfeI NcoI NheI NotI
PacI PmeI PmlI PspXI RsrII SacI SacII
SbfI SexAI SfiI SnaBI SpeI SrfI StuI
ZraI

      pET-N-GST-Thrombin-C-His中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-Thrombin-C-His once)包括:

DraIII CAC,NNN`GTG 242 BstEII G`GTNAC,C 4060
PsiI TTA|TAA 370 MluI A`CGCG,T 4242
PvuI CG,AT`CG 943 BstAPI GCAN,NNN`NTGC 4563
AsiSI GCG,AT`CGC 943 SphI G,CATG`C 4771
SmaI CCC|GGG 1067 SgrAI CR`CCGG,YG 4923
XmaI C`CCGG,G 1067 XbaI T`CTAG,A 5034
TspMI C`CCGG,G 1069 NdeI CA`TA,TG 5074
NruI TCG|CGA 1286 MscI TGG|CCA 5286
AcuI CTGAAG(N)14,NN` 1597 BstBI TT`CG,AA 5476
AlwNI CAG,NNN`CTG 1729 SwaI ATTT|AAAT 5506
BssSI C`ACGA,G 1968 ScaI AGT|ACT 5652
BstZ17I GTA|TAC 2374 BamHI G`GATC,C 5751
Tth111I GACN`N,NGTC 2399 HindIII A`AGCT,T 5757
PflFI GACN`N,NGTC 2399 PstI C,TGCA`G 5763
PpuMI RG`GWC,CY 3136 EcoRI G`AATT,C 5769
FspI TGC|GCA 3164 EcoRV GAT|ATC 5777
BglI GCCN,NNN`NGGC 3182 SalI G`TCGA,C 5781
PshAI GACNN|NNGTC 3401 BglII A`GATC,T 5787
HpaI GTT|AAC 3740 XhoI C`TCGA,G 5793
BssHII G`CGCG,C 3831 PaeR7I C`TCGA,G 5793
ApaI G,GGCC`C 4035 BlpI GC`TNA,GC 5872
PspOMI G`GGCC,C 4035 StyI C`CWWG,G 5894
NmeAIII GCCGAG(N)19,NN` 4041

      pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
      pET-R primer (5869-5888): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
      pET-N-GST-Thrombin-C-His的全序列信息:D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His.txt
      不同原核表达质粒的比较和选择,以及标签、蛋白酶切位点和蛋白共表达的考虑可以参考如下网页:
      http://www.beyotime.com/support/prokaryotic-plasmids.htm
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2911 pET-N-GST-Thrombin-C-His 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. pET-N-GST-Thrombin-C-His质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。

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D2931 pET-Dual-N-GST 1μg
D2933 pET-Dual-N-GST-PreScission 1μg
P2210 BeyoGold™ His-tag Purification Resin 10ml
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