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 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)

  产品编号D0251
  产品包装: 1ml
  产品价格: 78.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 1ml 78.00元

      碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),即DNA寡核苷酸退火缓冲液,是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火,而且特别适合于较难退火的用于RNAi(也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,极易自身形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
      使用本试剂盒操作非常简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后,置于PCR仪上,约90分钟即可完成。
      如果一次退火反应体积为100微升,一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D0251 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 1ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存,一年有效。
注意事项:
      Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 只适合于DNA oligo的退火,不能用于RNA oligo 的退火。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的Milli-Q水或重蒸水配制成50μM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X),混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系:

Nuclease-Free Water 40μl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 20μl
DNA oligo A (50μM) 20μl
DNA oligo B (50μM) 20μl
总体积 100μl

按照上述顺序依次加入各种试剂,混匀。如果所用的PCR仪没有热盖,滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应:

步骤 温度 时间 说明
1 95℃ 2分钟 让oligo充分变性
2 每8秒下降0.1℃,降至25℃(注1) 约90分钟 退火
3 4℃ 长时间保持 暂时存放

注1:如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能,也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应,也可以在-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。

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使用本产品的文献:
1. Qu B, Han X, Tang Y, Shen N.
A Novel Vector-Based Method for Exclusive Overexpression of Star-Form MicroRNAs.
PLoS One. 2012;7(7):e41504. 
2.Jiang W, Liang P, Wang B, Fang J, Lang J, Tian G, Jiang J, Zhu TF.
Optimized DNA extraction and metagenomic sequencing of airborne microbial communities.
Nat Protoc. 2015 May;10(5):768-79.
3.Huang G, Gao Q, Zhao Y, Dong Z, Li T, Guan X, Jiang J.
A novel siRNA validation system for functional screening of effective RNAi targets in mammalian cells and development of a derivative lentivirus delivery system.
Gene. 2015 Mar 10;558(2):278-86.