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 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X)

  产品编号D0139
  产品包装: 0.2ml
  产品价格: 251.00元
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D0139 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 0.2ml 251.00元

      碧云天的Gel-Red(凝胶红)核酸染料是一种EB (Ethidium bromide,溴化乙锭)的升级换代产品,用于凝胶中DNA、RNA等核酸的染色。Gel-Red具有安全(致突变性极低且检测不到显著的细胞毒性)、灵敏度高、稳定性好等优点,凝胶中的核酸在使用本产品染色后用适当紫外灯(300nm左右波长)检测呈现红色荧光,适用于原先使用EB为染料的凝胶成像系统。
      Gel-Red比EB和SYBR Green更安全。Gel-Red在远高于其工作浓度范围时均没有细胞毒性及诱变性。艾姆斯氏试验(Ames test)结果表明,Gel-Red的诱变性远小于EB。EB在多种致突变测试中呈现很强的诱变性,而Gel-Red仅仅在浓度高达20微克/毫升时,并在S9代谢活化时有非常微弱的诱变性。通常Gel-Red在凝胶中的工作浓度约为2微克/毫升,大大低于可导致诱变的浓度。Gel-Red和碧云天的另外一种安全型核酸染料Gel-Green,由于它们特殊的化学结构使其难以进入细胞,从而大大降低甚至避免了染料的致突变性和细胞毒性。而SYBR Green染料可以穿透细胞膜,进入活细胞并染色DNA,并且有报道SYBR Green可以强烈增强紫外线诱导的基因突变。
      Gel-Red检测灵敏度高,对于小分子量核酸的染色效果好。Gel-Red的检测灵敏度比EB高8-10倍,在检测低浓度、微量DNA或RNA方面比EB更佳,尤其对小分子量的DNA检测非常灵敏。在使用浸泡染色法时,Gel-Red和SYBR Gold的灵敏度相近甚至更高;与SYBR Gold不同的是,Gel-Red预先配制在凝胶中也有很高的灵敏度。EB对于小分子量核酸的染色效果差,而Gel-Red对于小分子量核酸的染色效果很好,便于观察酶切或PCR获得的小分子量核酸片段。推荐使用的Gel-Red浓度,其检测效果略优于EB。如果希望获得更高的染色灵敏度,可以适当提高Gel-Red的工作浓度。
      Gel-Red的稳定性好,染色重复性高。含SYBR Green的凝胶核酸染色的重复性比较差,这通常是由于SYBR系列染料的稳定性差导致的。而Gel-Red的稳定性很好,可以室温长时间保存及使用微波炉加热。Gel-Red的光稳定性良好,可以在室内正常光线下操作而无需避光。由于其热稳定性和光稳定性,含Gel-Red的凝胶在核酸染色时的重复性非常好。 
      Gel-Red可以使用和EB相同的检测体系。Gel-Red和EB的激发光和发射光都非常接近,可以直接用Gel-Red替换EB,而不必更换已有的凝胶观察、拍照或成像系统(约300nm激发)。Gel-Red的激发光谱和发射光谱请参考图1。


图1. Gel-Red的激发光谱和发射光谱

      Gel-Red的使用方法和EB一致。Gel-Red可以按适当比例直接加入琼脂糖中配制成凝胶,也可以在电泳完毕后对凝胶进行染色。前者更加方便,而后者灵敏度要更高一些。但由于Gel-Red本身已经非常灵敏,通常采用把Gel-Red直接配制在凝胶中就可以了。对于一些特殊情况,如核酸样品量特别少的情况等,则可以考虑电泳后再对凝胶进行染色。
      Gel-Red对于核酸的迁移率影响非常小,小于SYBR Green对于核酸迁移率的影响。
      通过凝胶回收试剂盒(如碧云天或Qiagen的凝胶回收试剂盒)或酚氯仿抽提,可以有效去除与DNA或RNA结合的Gel-Red,从而确保不会影响后续的连接、酶切、PCR、测序等常规的分子生物学用途。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D0139 Gel-Red (EB升级换代产品, 10000X) 0.2ml
说明书 1份

保存条件:
      室温避光保存,至少一年有效。长期不使用时,也可以4℃或-20℃避光保存。
注意事项:
      为确保使用的不是假冒的Gel-Red,可以用细胞培养液把Gel-Red稀释至1X,然后对培养的活细胞进行染色。随后在荧光显微镜下尝试用各种激发光观察,如果发现活细胞细胞核出现明显的荧光,则可以判定为假冒产品。如果各种激发光下活细胞均无荧光,则说明该核酸染料是不能进入活细胞的高度安全的染料。具有强致突变性的吖啶橙(Acridine Orange)染色核酸后呈现荧光,但其可以染色活细胞,而Gel-Red不会染色活细胞。
      Gel-Red和EB一样,作为荧光染料均需避光保存,但在使用过程中的常规室内光照不会影响其使用效果。
      制备好的Gel-Red琼脂糖凝胶,在4避光条件下通常可以保存3-5天。
      Gel-Red琼脂糖凝胶再次熔化使用时,为取得更好的观察效果,需要添加适量Gel-Red。
      电泳之后的凝胶不建议重复使用。
      电泳后再使用Gel-Red染色的凝胶一般不需要脱色。如果发现背景太高,可以使用不含核酸酶的水进行脱色处理。
      Gel-Red和Gel-Green除了可以染色双链DNA外,也可染色单链DNA和RNA。Gel-Red对单链核酸的染色灵敏度约为对双链DNA染色灵敏度的一半。Gel-Red对单链核酸的染色灵敏度约为Gel-Green的5倍。
      如果使用聚丙烯酰胺凝胶,请使用浸泡染色法染胶,并延长染色时间至30分钟-1小时。
      如果观察到条带弥散或者分离不理想,建议使用浸泡染色法染色以确认是否与染料有关。如果浸泡染色法染色后仍然出现类似的问题,说明与染料无关,请尝试以下方法:使用新鲜配制的电泳缓冲液、降低核酸的上样量、降低染料的浓度、降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、降低电泳电压一倍以上并延长凝胶电泳时间以改善电泳效果、使用更薄的梳齿等。
      本产品兼容常用的电泳缓冲液,例如TAE和TBE。
      Gel-Red不属于有毒有害物质,并通过了环境安全相关测试,相关废弃物无需特殊处理,可以参考常规化学试剂进行处理。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。 
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
Gel-Red和EB(溴化乙锭)一样可以根据使用者的偏好或实验目的采用以下方法中的一种:
1. 琼脂糖凝胶中添加Gel-Red。
根据需要配制适当浓度(例如1-3%)的琼脂糖胶液。在琼脂糖完全融解后,适当冷却但又不会使琼脂糖凝固时,按照每100毫升胶液加入10微升Gel-Red的比例(10000:1)加入Gel-Red。混匀后即可把琼脂糖胶液倒入制备凝胶的模具中。适量的DNA或RNA在该胶中电泳后,在紫外灯下可以观察到明亮的核酸条带。
说明:Gel-Red非常稳定,所以Gel-Red可以像EB一样在琼脂糖凝胶液加热融解后 但未凝固前加入并混匀,也可以在琼脂糖融解前加入,然后再微波炉加热融解并混匀。
2. 电泳完毕后对琼脂糖凝胶染色。
按照每100毫升100mM NaCl溶液或水中加入20-40微升Gel-Red的比例(2500-5000:1)加入Gel-Red,配制成Gel-Red染色液。把电泳完毕的琼脂糖凝胶放到适当的容器中,加入适量上述配制好的Gel-Red染色液,确保至少盖住凝胶。在摇床上缓慢摇动(约30-50rpm)染色20-30分钟。染色时间根据胶的厚度 而定,胶厚则染色时间需要长一些,胶薄则染色时间可以短一些。染色完毕后,在紫外灯下即可观察 核酸条带。要观察到更为清晰的条带,可以在染色后用水漂洗1-2次,每次3-5分钟,以消除背景,然后在适当紫外灯下或用凝胶成像系统观察。Gel-Red染色液可以重复使用3次左右。Gel-Red染色液也可以一次大量制备,在室温下避光保存,直至用完。对于核酸需要回收的情况,操作过程中需要注意 避免核酸酶污染。

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