产品简介:
H5N1神经氨酸酶抑制剂鉴定试剂盒(H5N1 Neuraminidase Inhibitors Identification Kit)是一个用荧光法快速高灵敏度鉴定禽流感病毒H5N1神经氨酸酶抑制剂的试剂盒。
禽流感病毒在其外壳上有两种糖蛋白,一种是haemagglutinin,简称HA,另一种是neuraminidase,简称NA,也称唾液酸酶(sialidase)。目前治疗H5N1型禽流感的药物包括瑞士罗氏制药公司生产的Oseltamivir(Tamifu,达菲为其商品名)和葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline)生产的Zanamivir(Relenza,瑞乐砂为其商品名),这两种药物都是neuraminidase的抑制剂。但达菲价格昂贵,普通百姓很难承受。并且达菲生产能力有限,如果发生较大规模的禽流感疫情该药物的供给量有限。另外,最近在越南发生的禽流感疫情中已经发现了达菲耐受的禽流感病毒,在达菲的临床测试中就发现存在一些对达菲耐受的禽流感病毒。Zanamivir不能口服,使应用范围受到限制。因此,寻找新的神经氨酸酶抑制剂作为治疗禽流感的药物非常迫切。希望本试剂盒能协助一些禽流感研究专家寻找到更好的价廉物美的禽流感药物。
提供了H5N1神经氨酸酶,可以在用碧云天提供的神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒进行初步筛选的基础上,对筛选出来的抑制剂能否有效抑制H5N1神经氨酸酶进行鉴定。
本试剂盒可以鉴定溶解于水的抑制剂,也可以鉴定溶解于甲醇、乙醇、DMSO的抑制剂。其它溶剂未经测试。
本试剂盒价格相对较贵,对神经氨酸酶抑制剂进行初步筛选时建议使用碧云天生产的(P0309)神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒。
一个包装的本试剂盒可以检测100个样品或标准品。
包装清单:
产品编号 |
产品名称 |
包装 |
P0310-1 |
神经氨酸酶检测缓冲液 |
10ml |
P0310-2 |
H5N1神经氨酸酶 |
1ml |
P0310-3 |
神经氨酸酶荧光底物 |
1ml |
P0310-4 |
Milli--Q水 |
1.2ml |
— |
说明书 |
1份 |
保存条件:
-20℃保存,半年有效。
注意事项:
H5N1神经氨酸酶和神经氨酸酶荧光底物尽量避免反复冻融。
试剂盒中所用溶液溶解后4℃保存,两天有效。如果两天内不能全部用完,尽早把留作以后使用的H5N1神经氨酸酶和神经氨酸酶荧光底物适当分装后-70℃保存,-20℃冻存也可,但有效期会较短。其余试剂直接-20℃或-70℃保存即可。
需使用荧光酶标仪,并需自备专门用于荧光酶标仪荧光检测的96孔荧光酶标板。或使用可以检测小体积样品的荧光分光光度计。使用荧光分光光度计时参考荧光酶标板的操作方法。
由于荧光检测非常灵敏,测定出来的荧光强度有时容易产生波动。一方面要避免灰尘等掉入检测孔中产生荧光干扰,另一方面所有检测最好在同一块检测板上做双份平行检测甚至三份平行检测。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 标准曲线检测的准备(参考表1):
a. 在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。
b. 每孔再分别加入0、1、2、5、7.5、10微升神经氨酸酶。
c. 每孔再加入0-20微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。
2. 样品检测的准备(参考表1):
a. 在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。
b. 每孔再加入10微升H5N1神经氨酸酶。
c. 每孔再加入0-10微升待筛选的神经氨酸酶抑制剂样品。
d. 每孔再加入0-10微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。
3. 检测(参考表1):
a. 振动混匀约1分钟。
b. 37℃孵育2分钟使抑制剂和H5N1神经氨酸酶充分相互作用,做标准曲线的样品也一起孵育。
c. 每孔加入10微升神经氨酸酶荧光底物。
d. 再振动混匀约1分钟。
e. 37℃孵育20分钟后进行荧光测定。激发波长为360nm,发射波长为440nm。
如果所用的荧光酶标仪的灵敏度较高,37℃孵育10分钟后即可进行荧光测定。如果所用的荧光酶标
仪的灵敏度较低,可以在孵育30分钟或60分钟后进行荧光测定。由于反应是连续进行的,可以在不
同时间点进行测定,以确定适合您的检测体系的最佳孵育时间。
表1
|
标准曲线 |
样品 |
神经氨酸酶检测缓冲液 |
70 μl |
70μl |
H5N1神经氨酸酶 |
0-10 μl |
10 μl |
待测样品 |
- |
0-10 μl |
Milli-Q水 |
0-20 μl |
0-10 μl |
神经氨酸酶荧光底物 |
10 μl |
10 μl |
总体积 |
100 μl |
100 μl |
4. 计算:
根据标准曲线可以计算出样品对于H5N1神经氨酸酶的抑制百分比。对鉴定出来的有效的抑制剂,做适当
的浓度曲线就可以测定出该抑制剂对于H5N1神经氨酸酶的IC50。