使用说明：
1.推荐工作浓度：推荐的作用于哺乳动物细胞的Blasticidin S浓度一般为1-50μg/ml，但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定。
表1.部分常见哺乳动物细胞的推荐工作浓度表
| 细胞名称 | 细胞类型 | Blasticidin S浓度 |
| A549 | Human lung cancer | 10μg/ml |
| CHO | Chinese hamster ovarian | 5-10μg/ml |
| HEK293 | Human embryonic kidney | 5-15μg/ml |
| HeLa | Human cervical cancer | 2.5-10μg/ml |
| HepG2 | Human hepatocellular carcinoma | 4-5μg/ml |
| Neuro2a | Mouse neuroblasts | 30μg/ml |
| HT1080 | Human fibrosarcoma | 5-20μg/ml |
| MCF-7 | Human breast cancer | 2-5μg/ml |
| THP-1 | Human monocytes | 10μg/ml |
| B16 | Mouse melanoma tumor | 3-10µg/ml |
2.Blasticidin S剂量反应曲线的确定
Blasticidin S的有效筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到具有Blasticidin S抗性的稳定细胞株，需要确定杀死未转染/感染宿主细胞所需的Blasticidin S的最低浓度，可以通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线(dose-response curve or kill curve)。
a.第一天：将正常的细胞按照约25%的密度接种在适宜的细胞培养板上，于细胞培养箱内培养过夜。
b.第二天：将培养过夜的细胞培养基换成新鲜的含不同浓度Blasticidin S的筛选用培养基，Blasticidin S浓度可以设置为0、2、4、6、8和10μg/ml等，每个浓度设置2个复孔，于细胞培养箱内继续培养。注：也可以根据自己的实验体系，设置不同的浓度梯度。
c.每3-4天更换新鲜的筛选培养基，并观察存活细胞的比例。
d.选择在加入Blasticidin S后7-10天杀死大多数细胞的最低浓度为最佳筛选浓度。
3.哺乳动物稳定表达细胞株的筛选
转染含有bsr或BSD基因的质粒或者感染含有该基因的病毒后，即可筛选稳定表达株。
a.细胞转染或感染48小时后，将细胞置于含有适当浓度Blasticidin S的新鲜培养基中培养，此为处理组。
注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降，所以细胞的密度最好不超过25%。建议同时做一个正常细胞的对照组。转染或感染48小时后，如果细胞过密也可以消化后重新接种细胞，培养过夜后即可进行Blasticidin S筛选。
b.每3-4天去除培养基，加入含Blasticidin S的新鲜培养基。
c.筛选7-10天后，对照组正常细胞应该100%死亡，处理组中存活的细胞为表达bsr或BSD基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。根据宿主细胞种类和转染/筛选效率，集落形成可能需要一周或更多的时间。
d.克隆形成后，挑取并转移5-10个抗性克隆到35mm细胞培养板中，加入选择培养基维持培养7天。随后用细胞毒性实验进行检测。
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