使用说明:
1.抗体混合液与HSA快速去除试剂混合。取出抗体溶液和HSA快速去除试剂,抗体溶液与HSA快速去除试剂
按照5:4的体积比进行混合,并充分混匀。如每100μl抗体溶液中加入80μl HSA快速去除试剂并充分混匀。
注1:使用前一定要充分重悬本产品,即充分颠倒若干次使混合均匀。如果本产品析出沉淀,可以42ºC水浴加热10分钟或更长时间,期间可以摇晃加速沉淀溶解,待完全溶解并混匀后使用。
注2:实验前须检测抗体混合液中抗体和HSA的浓度,以确保在本产品的适用范围内。抗体浓度应为0.03-10mg/ml,抗体浓度越高去除效果越好;HSA浓度应小于0.5% (5mg/ml),若HSA浓度较高,可用去离子水或蒸馏水进行稀释,或者重复一次以完全去除HSA。
2.室温摇动孵育10分钟。在混匀仪或侧摆摇床上低转速室温孵育10分钟。推荐使用BeyoShaker™数字式翘板摇床(
E6673)。
3.离心。将孵育后的样品13,000×g室温离心5分钟,此时离心管底部通常可见白色沉淀。
注1:离心时间可以根据抗体缓冲液的组份等的不同进行调整。
注2:请仔细核对离心力,离心力不能超过13,000×g。
4.去除上清。小心吸除上清至洁净的离心管中,切勿触及沉淀,也不可剧烈晃动离心管。可暂时保存上清,待确定去除效果后再丢弃。
5.重悬沉淀。根据后续实验要求在含有沉淀的离心管里加如适当体积的合适的缓冲液,使用移液器小心吹打20-30次,重悬抗体沉淀,吹打时避免产生气泡。
注:如果看不到明显的白色沉淀,可以在沉淀可能形成的区域用移液器小心吹打。
6.SDS-PAGE检测(选做)。通过SDS-PAGE电泳实验检测HSA去除的效果,注意设置未去除时的对照。
7.抗体保存。如果短时间内使用,建议将抗体溶液保存在4ºC;如果暂不使用,建议将抗体溶液保存在-20ºC或-80ºC。
参考文献:
1.Kawai Y, Masutani K, Torisu K, Katafuchi R, Tanaka S, et al. PLoS One. 2018. 13(5):e0196655.
2.Roche M, Rondeau P, Singh NR, Tarnus E, Bourdon E. FEBS Lett. 2008. 582(13):1783-1787.
3.Nouraei MS, Faghihi H, Najafabadi AR, Zadeh AHM, Darabi M, et al. AAPS PharmSciTech. 2019. 20(8):327.
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