使用说明：
1.对于培养细胞样品：
a.融解RIPA完全裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
b.
对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1-2秒后，细胞就会被裂解，再孵育约1-2分钟，絮状或粘稠状物即会消失。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。
对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻vortex或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。
对于细菌或酵母：对于1ml菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后，轻轻vortex或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100-200微升裂解液，轻轻vortex或者弹击管底以混匀，冰上裂解2-10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞或者1ml的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。每100万动物细胞用100微升本产品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为2-5mg/ml，不同细胞有所不同。
c.充分裂解后，10,000-14,000×g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
2.对于组织样品：
a.把组织剪切成细小的碎片。
b.融解RIPA完全裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
c.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
d.用玻璃匀浆器匀浆，或使用碧云天生产的TissueMaster™高通量组织研磨仪(1.5/2ml×48) (
E6618)、TissueMaster™手持式组织研磨仪(
E6600)研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。
e.充分裂解后，10,000-14,000×g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200微升本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15-35mg/ml，不同状态的不同组织有所不同。
f.如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。推荐使用碧云天的BeyoVortex™基础型涡旋混匀仪(
E6788)或BeyoVortex™调速式涡旋混匀仪(
E6699)。
附录：碧云天生产的各种裂解液主要特点、差异和选择
首先请参考下表，了解各种裂解液的主要特点和差异。
| 产品编号 |
P0013/P0037 |
P0013B/P0038 |
P0013C/P0039 |
P0013D/P0040 |
P0013F |
P0013G |
P0013J |
P0013K |
| 产品名称 |
Western及IP细胞(完全)裂解液 |
RIPA(完全)裂解液(强) |
RIPA(完全)裂解液(中) |
RIPA(完全)裂解液(弱) |
NP-40裂解液 |
SDS裂解液 |
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂) |
RIPA裂解液(强，无抑制剂) |
| 有效裂解成分 |
1% Triton X-100 |
1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.25% deoxycholate |
1% NP-40 |
1% SDS |
1% Triton X-100 |
1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS |
| 裂解强度 |
温和 |
强 |
中 |
温和 |
温和 |
强 |
温和 |
强 |
| 对膜蛋白的提取 |
一般 |
很好 |
较好 |
一般 |
一般 |
很好 |
一般 |
很好 |
| 对胞浆蛋白的提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
| 对核蛋白的提取 |
较好/很好 |
很好/非常好 |
较好/很好 |
较好/很好 |
较好 |
很好 |
较好 |
很好 |
| 胞浆磷酸化蛋白提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
| 细胞核转录因子提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
| 含蛋白酶抑制剂 |
是 |
是 |
是 |
是 |
是 |
是 |
否 |
否 |
| 含磷酸酯酶抑制剂 |
是 |
是 |
是 |
是 |
是 |
是 |
否 |
否 |
| 不同物种样品兼容性 |
高 |
高 |
高 |
高 |
高 |
高 |
高 |
高 |
| 主要用途 |
WB, IP, co-IP |
WB, IP |
WB, IP |
WB, IP, co-IP |
WB, IP, co-IP |
WB, ChIP |
WB, IP, co-IP |
WB, IP |
用于普通的Western、IP或co-IP，我们推荐使用Western及IP细胞裂解液或Western及IP细胞完全裂解液(
P0013/
P0037)，Western及IP细胞裂解液已被国内各大研究机构广泛使用，发表大量SCI论文，用户普遍反映很好。裂解细胞或组织后，没有非常粘滞的透明状DNA团块形成，不必采用超声处理等就可以非常理想地用于后续操作。另外该裂解液裂解的产物也适合用于磷酸化蛋白的Western检测。
对于某些特殊蛋白的IP，如果发现Western及IP细胞裂解液或Western及IP细胞完全裂解液(
P0013/
P0037)效果不是非常理想，可以尝试用RIPA裂解液(强、中或弱)、RIPA完全裂解液(强、中或弱)或NP-40裂解液。如果发现IP的时候背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则需要选用裂解强度较高的裂解液，例如RIPA裂解液(强或中)、RIPA完全裂解液(强、中或弱)。如果发现目的蛋白无法被IP下来，则说明裂解液的强度过强，可以使用较为温和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)、RIPA完全裂解液(弱)或NP-40裂解液。
对于某些难溶解蛋白的Western，如果发现Western及IP细胞裂解液或Western及IP细胞完全裂解液(
P0013/
P0037)效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强、中)、RIPA完全裂解液(强、中或弱)或SDS裂解液。使用RIPA裂解液(强)的用户也非常多，发表了大量SCI论文。
对于希望获得更好的裂解效果的情况，推荐使用完全裂解液系列产品(
P0037-
P0040)，对于一些蛋白的提取效果有可能会大幅改善。
用于特定用途需要自行添加特定抑制剂或不需要添加抑制剂时，可以考虑选购
P0013J或
P0013K。
P0013J在很多时候可以兼容酶活性和生物小分子的检测，对于特定的酶或生物小分子的检测是否兼容需要自行测试，碧云天不提供具体的应用信息。
P0013J的裂解能力比
P0013K弱一些，但用于酶活性和生物小分子时，
P0013J的兼容性通常会更好一些。
参考文献：
1.Shehadul Islam M, Aryasomayajula A, Selvaganapathy PR. Micromachines (Basel). 2017. 8(3):83.
2.Janes KA. Sci Signal. 2015. 8(371):rs2.
相关产品：
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| P0013 |
Western及IP细胞裂解液 |
100ml |
| P0037-100ml |
Western及IP细胞完全裂解液 |
100ml |
| P0013B |
RIPA裂解液(强) |
100ml |
| P0038-100ml |
RIPA完全裂解液(强) |
100ml |
| P0013C |
RIPA裂解液(中) |
100ml |
| P0039-100ml |
RIPA完全裂解液(中) |
100ml |
| P0013D |
RIPA裂解液(弱) |
100ml |
| P0040-100ml |
RIPA完全裂解液(弱) |
100ml |
| P0013E |
RIPA裂解液(强中弱套装) |
共150ml |
| P0013F |
NP-40裂解液 |
100ml |
| P0013G |
SDS裂解液 |
100ml |
| ST506 |
PMSF (100mM) |
10ml |
| P1005 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) |
1ml |
| P1006 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) |
5ml |
| P1008 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
1ml |
| P1009 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
5ml |
| P1010 |
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) |
1ml |
| P1011 |
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) |
5ml |
| P1015 |
蛋白酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 100X) |
1ml |
| P1016 |
蛋白酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 100X) |
5ml |
| P1020 |
蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 100X) |
1ml |
| P0007 |
蛋白标准(5mg/ml BSA) |
1ml |
| P0009 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
5000次 |
| P0010 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
500次 |
| P0010S |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
200次 |
| P0011 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
5000次 |
| P0012 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
500次 |
| P0012S |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
200次 |