使用说明：
1.小量可溶性蛋白抽提。
通过小量蛋白抽提实验来检测目的蛋白是否表达或存在，然后再进行大量的蛋白提取。
a.按照常规方法进行重组蛋白表达菌株的培养以及目的蛋白的诱导表达。
b.取1.5ml OD600为0.5-2.0的菌液，12,000-16,000g 4℃或室温离心2min，弃上清。
c.用0.2-0.4ml BeyoLytic™细菌活性蛋白抽提试剂重悬细胞，可短暂涡旋混合以充分重悬。室温孵育15min。
d.12,000-16,000g (16,000g更佳) 4℃离心5min。
e.小心吸取上清，即为抽提获得的可溶性蛋白。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
f.通过SDS-PAGE或Western blot等方法检测目的蛋白存在于上清还是不溶性沉淀中。SDS-PAGE电泳时，每个样品的上样量推荐为5-15μl。
2.大量可溶性蛋白抽提。
a.按照常规方法进行重组蛋白表达菌株的培养以及目的蛋白的诱导表达。
b.收集250ml OD600约为2.0的菌液，5,000g 4℃或室温离心10min，弃上清后可获得约1g的湿菌。后续可以直接用于裂解或冻存后用于裂解，通常冻存后再裂解可以获得更高的蛋白得率。但冻融对于某些蛋白的活性可能会起到负面影响。
c.按照每1g湿菌加入20-50ml BeyoLytic™细菌活性蛋白抽提试剂(在使用前可加入适当的蛋白酶抑制剂)的比例进行抽提，用移液管反复吹打混匀。加入较少的抽提试剂可以获得较高浓度的蛋白，但抽提效率会有所下降；加入较多的抽提试剂可以获得更高的抽提效率，但蛋白浓度会相对较低。如果较易取得比较多的湿菌，推荐使用较少的抽提试剂。此外，为取得最佳结果，可加入最终浓度为2mg/ml的
溶菌酶(ST206)和2mM的EDTA以进一步改善抽提效果，可以加入最终浓度为50U/ml的
BeyoZonase™超级核酸酶(D7121/D7126)以降低粘稠度。
d.
室温孵育15min，充分抽提蛋白。
e.12,000-16,000g (16,000g更佳) 4℃或室温离心10min。
f.小心吸取上清，即为抽提获得的可溶性蛋白。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
g.通过SDS-PAGE或Western blot等方法检测目的蛋白存在于上清还是不溶性沉淀中。SDS-PAGE电泳时，每个样品的上样量推荐为5-15μl。
常见问题：
1.目的蛋白产量低。
a.细菌裂解不充分。反复冻融细菌促进细胞破裂，或者加入溶菌酶都有助于蛋白的抽提。
b.样品的粘稠度太高。加入
BeyoZonase™超级核酸酶(D7121/D7126)或
DNase I (D7073/D7076)可降低样品的粘稠度，有助于可溶性蛋白的抽提。
c.目的蛋白降解了。加入蛋白酶抑制剂可降低目的蛋白的降解。推荐选购碧云天生产的
蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X) (P1025/P1026)、
蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X) (P1030/P1031)或
PMSF (100mM) (ST506)。
d.目的蛋白的表达水平低。可加入较高浓度的IPTG、延长诱导时间、调整诱导温度等，同时考虑检查构建的质粒，或选用其它蛋白表达菌株。
e.目的蛋白可能是不溶性的。检查离心后的沉淀，确定目的蛋白是否形成了包涵体。
f.蛋白抽提试剂加入量太少。适量增加蛋白抽提试剂的量。
2.抽提的可溶性蛋白溶液浑浊不透明。
a.加入的蛋白抽提试剂的量不足。适当增加抽提试剂的用量。
b.细菌裂解不充分。可以尝试在蛋白抽提的时候添加溶菌酶，添加溶菌酶后很可能会使最终的蛋白溶液变澄清。
c.抽提后的蛋白样品冻存时间过长。建议在1-2周内使用抽提后的蛋白溶液进行后续实验。
d.分离蛋白上清和沉淀时的离心力或离心时间不够。确保14,000g离心15min，或使用更大的离心力或离心更长时间。
e.表达的目的蛋白发生聚集。加入甘油至终浓度为40-50%通常可以阻止蛋白聚集和析出，或者用硫酸铵沉淀法将目的蛋白从抽提试剂中沉淀下来，再设法溶解。
f.低温导致蛋白溶解性下降。恢复到室温，增加蛋白溶解性可能会使溶液变澄清。这种情况下增加抽提试剂用量也可以解决该问题的。
3.抽提的可溶性蛋白溶液呈粘稠状。
a.加入的蛋白抽提试剂的量不足。适当增加抽提试剂的用量。
b.加入
BeyoZonase™超级核酸酶(D7121/D7126)或
DNase I (D7073/D7076)可降低样品的粘稠度。
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| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| C3601 |
细胞线粒体分离试剂盒 |
50-100次 |
| C3606 |
组织线粒体分离试剂盒 |
50-100次 |
| C3702 |
红细胞裂解液 |
120ml |
| D7073 |
DNase I |
200U |
| D7076 |
DNase I |
1000U |
| D7121-5KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
5KU |
| D7121-25KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
25KU |
| D7121-100KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
100KU |
| D7121-500KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
500KU |
| D7121-2000KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
2000KU |
| D7126-5KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
5KU |
| D7126-25KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
25KU |
| D7126-100KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
100KU |
| D7126-500KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
500KU |
| D7126-2000KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
2000KU |
| P0006C |
Bradford蛋白浓度测定试剂盒 |
800次 |
| P0009 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
5000次 |
| P0010 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
500次 |
| P0010S |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
200次 |
| P0011 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
5000次 |
| P0012 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
500次 |
| P0012S |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
200次 |
| P0013M-100ml |
BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 |
100ml |
| P0013Q-100ml |
BeyoLytic™细菌活性蛋白抽提试剂 |
100ml |
| P0013Q-500ml |
BeyoLytic™细菌活性蛋白抽提试剂 |
500ml |
| P0013S-100ml |
BeyoLytic™昆虫活性蛋白抽提试剂 |
100ml |
| P0013 |
Western及IP细胞裂解液 |
100ml |
| P0013B |
RIPA裂解液(强) |
100ml |
| P0013C |
RIPA裂解液(中) |
100ml |
| P0013D |
RIPA裂解液(弱) |
100ml |
| P0013E |
RIPA裂解液(强中弱套装) |
共150ml |
| P0013F |
NP-40裂解液 |
100ml |
| P0013G |
SDS裂解液 |
100ml |
| P0013J |
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂) |
100ml |
| P0013K |
RIPA裂解液(强, 无抑制剂) |
100ml |
| P0027 |
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| P0028 |
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 |
100次 |
| P0033 |
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒 |
100次 |
| P1005 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) |
1ml |
| P1006 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) |
5ml |
| P1008 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
1ml |
| P1009 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
5ml |
| P1010 |
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) |
1ml |
| P1011 |
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) |
5ml |
| P1015 |
蛋白酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 100X) |
1ml |
| P1016 |
蛋白酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 100X) |
5ml |
| P1020 |
蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 100X) |
1ml |
| P1021 |
蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 100X) |
5ml |
| P1025 |
蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X) |
1ml |
| P1026 |
蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X) |
5ml |
| P1030 |
蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X) |
1ml |
| P1031 |
蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X) |
5ml |
| P1045 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50X) |
各2ml |
| P1046 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50X) |
各10ml |
| P1048 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
各1ml |
| P1049 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
各5ml |
| P1050 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1051 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) |
各10ml |
| P1055 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1056 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 50X) |
各10ml |
| P1060 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1061 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 50X) |
各10ml |
| P1065 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1066 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 50X) |
各10ml |
| P2210 |
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) |
10ml |
| P2210FT |
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)(试用装) |
2ml |
| P2220 |
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) |
1000ml |
| P2226 |
His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) |
10ml |
| S3090 |
细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用) |
100ml |
| ST206 |
Lysozyme/溶菌酶(>20KU/mg) |
0.5g |
| ST506 |
PMSF (100mM) |
10ml |