使用说明：
1.溶液的准备。
a.取适量的BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，根据具体实验目的加入适量的蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂(例如碧云天生产的
P1050/P1051蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X)、
P1045/P1046 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50X)或
P1048/P1049 蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X)，也可以根据实验目的选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂混合物。放置于冰浴备用。如有必要，可以考虑选购
BeyoZonase™超级核酸酶(D7121/D7126)，并添加到本产品中使最终浓度为50U/ml以降低抽提产物的粘稠度。
2.贴壁细胞的蛋白抽提。
a.洗涤细胞(可选做)：吸除细胞培养液，加入适量PBS，轻轻摇动，吸除PBS。
注意：可根据具体情况，选择洗涤与否。如果培养液和培养液中添加的药物不会影响后续的实验，可以不进行细胞洗涤。如果影响比较大，就需要再重复洗涤一次。
b.裂解细胞：吸净细胞培养液或洗涤液，加入适量的BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，冰上孵育2-10min，具体用量参照表1。加入抽提试剂后会发现，细胞接触抽提试剂后会立即发生裂解。根据不同的细胞类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育2-20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让细胞充分裂解。对于常规的检测，抽提试剂加入后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加10-50%不等的蛋白得率，不同的细胞会有所不同。
表1. 不同规格的细胞培养器皿中碧云天BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂的用量表。
| Multiple Well Plates or Dishes |
Growth area (cm2)* |
Volume of Extraction Reagent (μl) |
| 10-cm dish |
55 |
500-1000 |
| 6-cm dish |
21 |
200-400 |
| 6-well plate |
9.5 |
100-200 |
| 12-well plate |
3.8 |
50-100 |
| 24-well plate |
1.9 |
25-50 |
| 48-well plate |
0.95 |
12.5-25 |
| 96-well plate |
0.32 |
5-10 |
c.用移液器将细胞抽提产物吹打悬起并转移到离心管中，14,000g 4℃离心5-10min。
d.将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
3.悬浮细胞的蛋白抽提。
a.收集细胞：将细胞2500g 4℃或室温离心10min，弃上清。
b.洗涤细胞(可选做)：用PBS洗涤细胞，2500g 4℃或室温离心10min，弃上清。
c.裂解细胞：弹击离心管底，使细胞沉淀适当分散开。参考表1，加入适量冰浴预冷的BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，适当混匀并冰上孵育2-10min，以裂解所有的细胞。加入抽提试剂后会发现，细胞接触抽提试剂后就会立即发生裂解。根据不同的细胞类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育2-20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让细胞充分裂解。对于常规的检测，裂解液加入后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。额外的孵育时间，可能会增加10-50%不等的蛋白得率，不同的细胞会有所不同。
d.14,000g 4℃离心5-10min。
e.将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
4.组织的蛋白抽提。
a.组织的处理：把组织剪切成细小的碎片，或液氮冷冻后研磨成粉末。
b.匀浆和抽提：按照每20mg组织加入200-400μl抽提试剂的比例加入BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂，用玻璃匀浆器匀浆，或使用碧云天生产的
E6600 TissueMaster™手持式组织研磨仪研磨，直至充分裂解。
c.冰上孵育2-10min。根据不同的组织类型和实验目的，可以随即进入后续步骤，或者在冰上继续孵育2-20min (如有必要也可以在摇床上冰浴以进一步改善抽提效果)，以让组织充分裂解。对于常规的检测，匀浆后无需额外的孵育，如果希望获得更多的蛋白，或者对于一些较难裂解提取的蛋白，则需要额外的孵育时间以提高得率。
d.14,000g 4℃离心5-10min。
e.将含有可溶性蛋白的上清转移到新的离心管中，立即用于后续分析检测，或者-20℃或-80℃保存备用。如有必要，可以考虑保留沉淀物用于后续分析。吸取上清时触及沉淀会导致抽提产物中含有更多的杂蛋白等。
常见问题：
1.抽提蛋白产量低。
a.细胞或组织裂解不充分。延长冰上孵育时间或在孵育期间适当摇动，或适当增加蛋白抽提试剂的使用量。
b.蛋白发生降解。加入蛋白酶抑制剂可抑制蛋白降解。
c.组织匀浆不太充分。适当延长匀浆或研磨时间。
d.蛋白溶液的粘稠度太高。一方面可以考虑加大抽提试剂的用量，另一方面可以考虑添加
BeyoZonase™超级核酸酶(D7121/D7126)等以降低粘稠度
2.外源表达蛋白量偏少或检测不到。
a.外源蛋白表达量低。考虑优化细胞质粒转染或病毒感染的操作流程。
b.质粒或病毒有误。考虑设置适当的阳性对照，并对质粒或病毒包装质粒进行测序和核对，并对表达效果进行测试和验证。
相关产品：
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| C3601 |
细胞线粒体分离试剂盒 |
50-100次 |
| C3606 |
组织线粒体分离试剂盒 |
50-100次 |
| C3702 |
红细胞裂解液 |
120ml |
| D7073 |
DNase I |
200U |
| D7076 |
DNase I |
1000U |
| D7121-5KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
5KU |
| D7121-25KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
25KU |
| D7121-100KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
100KU |
| D7121-500KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
500KU |
| D7121-2000KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%) |
2000KU |
| D7126-5KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
5KU |
| D7126-25KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
25KU |
| D7126-100KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
100KU |
| D7126-500KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
500KU |
| D7126-2000KU |
BeyoZonase™超级核酸酶(≥99%, with His-tag) |
2000KU |
| P0006C |
Bradford蛋白浓度测定试剂盒 |
800次 |
| P0009 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
5000次 |
| P0010 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
500次 |
| P0010S |
BCA蛋白浓度测定试剂盒(增强型) |
200次 |
| P0011 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
5000次 |
| P0012 |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
500次 |
| P0012S |
BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
200次 |
| P0013M-100ml |
BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 |
100ml |
| P0013Q-100ml |
BeyoLytic™细菌活性蛋白抽提试剂 |
100ml |
| P0013Q-500ml |
BeyoLytic™细菌活性蛋白抽提试剂 |
500ml |
| P0013S-100ml |
BeyoLytic™昆虫活性蛋白抽提试剂 |
100ml |
| P0013 |
Western及IP细胞裂解液 |
100ml |
| P0013B |
RIPA裂解液(强) |
100ml |
| P0013C |
RIPA裂解液(中) |
100ml |
| P0013D |
RIPA裂解液(弱) |
100ml |
| P0013E |
RIPA裂解液(强中弱套装) |
共150ml |
| P0013F |
NP-40裂解液 |
100ml |
| P0013G |
SDS裂解液 |
100ml |
| P0013J |
Western及IP细胞裂解液(无抑制剂) |
100ml |
| P0013K |
RIPA裂解液(强, 无抑制剂) |
100ml |
| P0027 |
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 |
50次 |
| P0028 |
细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 |
100次 |
| P0033 |
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白提取试剂盒 |
100次 |
| P1005 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) |
1ml |
| P1006 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 100X) |
5ml |
| P1008 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
1ml |
| P1009 |
蛋白酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
5ml |
| P1010 |
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) |
1ml |
| P1011 |
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X) |
5ml |
| P1015 |
蛋白酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 100X) |
1ml |
| P1016 |
蛋白酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 100X) |
5ml |
| P1020 |
蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 100X) |
1ml |
| P1021 |
蛋白酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 100X) |
5ml |
| P1025 |
蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X) |
1ml |
| P1026 |
蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X) |
5ml |
| P1030 |
蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X) |
1ml |
| P1031 |
蛋白酶抑制剂混合物(His-Tag蛋白纯化用, 100X) |
5ml |
| P1045 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50X) |
各2ml |
| P1046 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 50X) |
各10ml |
| P1048 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
各1ml |
| P1049 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型, 质谱兼容, 50X) |
各5ml |
| P1050 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1051 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 50X) |
各10ml |
| P1055 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1056 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(植物样品抽提用, 50X) |
各10ml |
| P1060 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1061 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(真菌或酵母抽提用, 50X) |
各10ml |
| P1065 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 50X) |
各2ml |
| P1066 |
蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 50X) |
各10ml |
| P2210 |
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) |
10ml |
| P2210FT |
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型)(试用装) |
2ml |
| P2220 |
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) |
1000ml |
| P2226 |
His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) |
10ml |
| S3090 |
细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用) |
100ml |
| ST206 |
Lysozyme/溶菌酶(>20KU/mg) |
0.5g |
| ST506 |
PMSF (100mM) |
10ml |