使用说明：
1.使用A3A将胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶的反应。
a.参考下表在冰浴中配制反应体系。
| Reagent |
Volume |
Final concentration |
| Nuclease-free Water (ST876) |
(17-x)μl |
- |
| 10X A3A Buffer |
2μl |
1X |
| ssDNA with C (10μM) |
xμl |
1.5μM |
| A3A (0.25μg/μl) |
1μl |
12.5ng/μl |
| Total volume |
20μl |
- |
注1：按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后低速离心沉淀液体。如果同时进行多个反应，可以把上表中除ssDNA之外的所有溶液和酶提前混合，分装到各反应管，最后再加入ssDNA。
注2：如果进一步检测A3A将胞嘧啶脱氨基转化为尿嘧啶的效果可在反应体系中同时加入Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) (
D7360)和Endonuclease VIII (
D6781)。
b.反应条件：37ºC孵育过夜。
c.终止反应：加入适量0.5% SDS或酚氯仿抽提可以使A3A失活。
2.EM-seq：使用Recombinant APOBEC3A (A3A)、Recombinant Ten-Eleven Translocase 2 (TET2) (D6753)和T4 Phage β-glucosyltransferase (T4-BGT) (D6755)进行酶法甲基化测序请自行参考相关文献进行[2]。
3.其它应用请参考相关文献进行。
参考文献：
1.Refsland EW, Harris RS. Curr Top Microbiol Immunol. 2013. 371:1-27.
2.Vaisvila R, Ponnaluri VKC, Sun Z, Langhorst BW, Saleh L, et al. Genome Res. 2021. 31(7):1280-1289.
相关产品：
| 产品编号 |
产品名称 |
包装 |
| D0068 |
DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒 |
50次/200次 |
| D0069 |
BeyoMag™磁珠法DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒 |
96次/4×96次 |
| D6751 |
Recombinant APOBEC3A (A3A) |
25μg/100μg/500μg |
| D6753 |
Recombinant Ten-Eleven Translocase 2 (TET2) |
10μg/50μg |
| D6755 |
T4 Phage β-glucosyltransferase (T4-BGT) |
500U/2500U |
| D6781 |
Endonuclease VIII |
1KU/5KU/20KU |
| D7360 |
Uracil-DNA Glycosylase (E. coli) |
1000U/5000U |
| R0212 |
DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) |
2ml/10ml |
| R0243S |
BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(15%, 10孔) |
10块 |
| R0244S |
BeyoGel™ TBE-Urea PAGE预制胶(15%, 15孔) |
10块 |
| ST876 |
BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) |
100ml/500ml |