使用说明：
1. 在一离心管或PCR管内加入100ng-1μg DNA模板，再加入适量试剂盒提供的Ultrapure Water，至总体积为34μl。
说明：通常100-300ng DNA模板已经足够用于一次标记反应。
2. 加入10μl Random Primer in Buffer (5X)，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
3. 沸水浴加热5分钟，或在PCR仪上100℃加热5分钟(如果不能设置100℃，99℃加热5分钟也完全可以)。
4. 立即放置到预先准备好的冰水浴中至少2-3分钟。
5. 加入5μl Biotin-Labeling Mix。
6. 加入1μl Klenow Fragment，混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
7. 37℃孵育1小时或过夜(不宜超过20小时)。37℃孵育过夜可以显著增加生物素标记DNA的产量，因此推荐孵育过夜(12-20)小时。
8. 加入3μl探针标记终止液，混匀，终止标记反应。至此标记反应已经全部完成，标记好的DNA可以-20℃保存。
9. 此时探针可以直接用于探针标记效率的检测及Southern、Northern等后续操作。
10. 整个探针标记反应的流程参见下表：

100ng-1μgDNA模板	xμl
Ultrapure Water	(34-x)μl
Random Primer in Buffer (5X)	10μl
100℃ 5分钟，立即冰浴冷却
Biotin-Labeling Mix	5μl
Klenow Fragment	1μl
总体积	50μl
37℃孵育过夜
探针标记终止液	3μl
-20℃保存
此时可用于标记效率的检测及Southern、Northern等后续检测

11. 探针标记效率的检测：可以对标记好的探针进行适当梯度稀释后，使用碧云天生产的化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒(D3308)或其它适当的方法进行检测。通常探针的标记效率可以参考下表：

模板DNA量	生物素标记DNA产量
－	孵育1小时	孵育20小时
10ng	80ng	900ng
30ng	150ng	1350ng
100ng	350ng	1650ng
300ng	750ng	2200ng
1000ng	1300ng	2600ng
3000ng	1600ng	2600ng

注意：具体的探针标记效率还和模板DNA的长度、纯度等因素有关，上表的数值仅供参考。
12. 使用本试剂盒所获得的生物素标记DNA的长度通常在数百bp左右。具体的长度因模板的长度而有所不同。例如模板DNA的长度为1kb，则生物素标记DNA产物的长度通常为100-1000bp，平均长度约为300bp左右。