使用说明:
1.MSC细胞的准备。细胞复苏后使用含血清和血小板提取物等的培养液或常规无血清细胞培养液培养2-3代至细胞生长状态正常。外泌体提取前,如有需要,可加入药物处理细胞。
2.待贴壁细胞汇合度在30-60%时,去除原培养液,PBS (C0221A/C0221B)润洗细胞3-5次,避免原有培养液血清中外泌体的污染。
注:具体的细胞密度和细胞增殖速度密切相关。对于增殖比较慢的细胞,建议汇合度在60-70%左右,这样提取到的外泌体比较多;对于增殖比较快的间充质干细胞,细胞密度可以适当降低。
3.将BeyoExo™间充质干细胞外泌体专用培养液与BeyoExo™间充质干细胞外泌体专用培养液添加剂按照100:1的比例混匀,例如50ml BeyoExo™间充质干细胞外泌体专用培养液中加入0.5ml BeyoExo™间充质干细胞外泌体专用培养液添加剂,混匀即为间充质干细胞外泌体完全培养液
4.加入适量间充质干细胞外泌体完全培养液继续培养2天左右。
5.待MSC细胞汇合度达80%左右时,收集细胞培养上清液,即为含间充质干细胞外泌体的溶液,可用于后续外泌体分离提取等实验。推荐使用碧云天的BeyoExo™增强型细胞上清外泌体提取试剂盒(沉淀法) (C3622)进行外泌体提取。
参考文献:
1.Metzelaar MJ, Wijngaard PL, Peters PJ, Sixma JJ, Nieuwenhuis HK, et al. J Biol Chem. 1991. 266(5):3239-45.
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