使用说明：
本使用说明以转染10ml Expi293F™细胞为例。
1.接种细胞：
转染前一天(18-24小时)根据细胞状态，接种合适的细胞密度(例如100万-150万cells/ml), 使第二天转染时细胞密度达到200万-300万cells/ml。
2.准备DNA与Lipo293F™ Plus转染试剂复合物：
a.DNA稀释液的配制：对于待转染的10ml Expi293F™细胞，取一个洁净无菌离心管，加入500μl细胞培养液和10μg DNA，并用移液器轻轻吹打混匀。
注：使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释，可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (
ST341)。
b.Lipo293F™ Plus转染试剂稀释液的配制：对于待转染的10ml Expi293F™细胞，取一个洁净无菌离心管，加入450-490μl细胞培养液和10-50μl Lipo293F™ Plus转染试剂，并用移液器轻轻吹打混匀。
注1：细胞培养液和Lipo293F™ Plus转染试剂总体积为500μl。
注2：使用生理盐水(0.9% NaCl)进行DNA的稀释，可能效果更好。推荐选购碧云天的生理盐水(0.9% NaCl, 无菌) (
ST341)。
c.DNA与Lipo293F™ Plus转染试剂复合物的配制：将配制好的Lipo293F™ Plus转染试剂稀释液加入到DNA稀释液中，轻轻涡旋混匀或者用移液器轻轻吹打混匀后，室温孵育10-20分钟。
注1：推荐DNA用量(μg)和Lipo293F™ Plus转染试剂(μl)的比例为1:2，可在1:1-1:5之间进行调整(甚至可以类似1:1.5或1:2.5的比例进行调整)，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化，摸索最佳的转染条件。
注2：建议采用转染试剂加入到DNA溶液的顺序，效果更佳。
d.对于不同体积的细胞培养液，DNA与Lipo293™ Plus转染试剂用量请参考下表，最佳的转染效果须自行适当优化。
| 转染体系体积 |
10ml |
20ml |
50ml |
100ml |
200ml |
500ml |
| 细胞培养液 |
0.5ml |
1ml |
2.5ml |
5ml |
10ml |
25ml |
| DNA |
10μg |
20μg |
50μg |
100μg |
200μg |
500μg |
| 细胞培养液 |
0.5ml |
1ml |
2.5ml |
5ml |
10ml |
25ml |
| Lipo293F™ Plus转染试剂 |
20μl |
40μl |
100μl |
200μl |
400μl |
1ml |
将配制好的Lipo293F™ Plus转染试剂稀释液加入到配制好的DNA稀释液中，室温孵10-20分钟
随后加入到培养的悬浮细胞中继续培养24-96小时，后续进行目的蛋白的检测和纯化。
|
3.转染细胞：
a.将1ml DNA与Lipo293F™ Plus转染试剂复合物均匀滴加到10ml Expi293F™细胞中。
b.在适宜的温度、湿度和CO2培养条件下，继续培养24-96小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选[1]。
附录：
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：
| Multiple Well Plates or Dishes |
Single Well Only for Plates |
| Diameter (Bottom, mm)* |
Growth Area (cm2)* |
Average Cell Yield |
Total Well Volume (ml) |
Working Volume (ml) |
Recommended Volume (ml) |
| 6 well |
34.8 |
9.5 |
9.5 × 105 |
16.8 |
1.9-2.9 |
2 |
| 12 well |
22.1 |
3.8 |
3.8 × 105 |
6.9 |
0.76-1.14 |
1 |
| 24 well |
15.6 |
1.9 |
1.9 × 105 |
3.4 |
0.38-0.57 |
0.5 |
| 48 well |
11.0 |
0.95 |
9.5 × 104 |
1.6 |
0.19-0.285 |
0.25 |
| 96 well |
6.4 |
0.32 |
3.2 × 104 |
0.36 |
0.10-0.20 |
0.1 |
| 384 well |
2.7 |
0.056 |
5.6 × 103 |
0.112 |
0.025-0.050 |
0.030 |
| 1536 well |
1.63 × 1.63** |
0.025 |
2.5 × 103 |
0.0125 |
0.005-0.010 |
0.010 |
| 3.5cm dish |
34 |
9 |
9.0 × 105 |
NA |
1.8-2.7 |
2 |
| 6cm dish |
52 |
21 |
2.1 × 106 |
NA |
4.2-6.3 |
5 |
| 10cm dish |
8.4 |
55 |
5.5 × 106 |
NA |
11-16.5 |
12 |
| 15cm dish |
14 |
152 |
1.5 × 107 |
NA |
30.4-45.6 |
35 |
| 24.5cm dish |
22.4 × 22.4** |
500 |
5.0 × 107 |
NA |
100-150 |
120 |
*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
**These wells or dishes are square.
参考文献：
1.Hasebe A, Tashima H, Ide T, Iijima M, Yoshimoto N, et al. Mol Biotechnol. 2012. 51(1):58-66.
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