碧云天的BeyoNectin™ Recombinant Human Fibronectin Fragment (BeyoNectin™重组人纤维连接蛋白片段)，简称BeyoNectin™，也称逆转录病毒感染及T细胞活化试剂(Retroviral Infection and T Cell Activation Reagent)或逆转录病毒感染增强试剂(Retroviral Infection Enhancing Reagent)，是一种重组人纤维连接蛋白片段，可提高病毒感染细胞的效率、促进细胞贴壁和生长、增强体外T细胞的激活和扩增等。BeyoNectin™属于生物大分子，与Polybrene (聚凝胺)和Protamine (鱼精蛋白)等病毒感染增强剂相比细胞毒性更低，不影响病毒感染后细胞的增殖，特别适合用于悬浮细胞、造血干细胞或其它病毒难感染的细胞[1, 2]。
BeyoNectin™与Takara的RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment (逆转录病毒感染及T细胞活化试剂) (T100)等系列产品提高病毒感染效率的原理和使用方法基本一致。
本重组人纤维连接蛋白片段包含三个功能区：Cell-binding domain (C-Domain)，Heparin-binding domain (H-Domain)和CS-1 sequence (CS-1)，其中C-Domain和CS-1分别能特异性结合细胞表面的VLA-5 (α5β1)和VLA-4 (α4β1)，H-Domain能结合慢病毒(Lentivirus)或逆转录病毒(Retrovirus)。BeyoNectin™包被于细胞培养容器表面后可通过共定位的方式促进细胞和病毒的结合，从而提高病毒感染细胞的效率。BeyoNectin™促进病毒感染的原理图请参考图1。
图1. 碧云天BeyoNectin™ Recombinant Human Fibronectin Fragment (C0352)促进病毒感染的原理图。
BeyoNectin™对表达整合素VLA-4或VLA-5的细胞有促进病毒感染的作用。表达VLA-4的细胞包括：T细胞、B细胞、单核细胞、NK细胞、嗜酸性粒细胞、骨髓单核细胞和淋巴祖细胞等；表达VLA-5的细胞包括：胸腺细胞、活化T细胞和肥大细胞等。BeyoNectin™能有效促进病毒感染细胞系，例如Jurkat、K-562、HL-60和NIH/3T3等细胞系；也能有效促进病毒感染原代细胞，例如CD34+骨髓细胞、骨髓源性单核细胞、人造血干细胞、人脂肪源性干细胞和人间充质干细胞等。
BeyoNectin™能促进泛嗜型(VSV-G)、单嗜型(Ecotropic)和兼嗜顾型(Amphotropic)包膜的慢病毒和逆转录病毒感染细胞，也适用于GALV包膜的逆转录病毒感染细胞。
BeyoNectin™增强感染效果好。BeyoNectin™与国外同类产品Competitor T促进慢病毒感染Jurkat、K-562和HL-60细胞系的效果请参考图2。
图2. 碧云天BeyoNectin™ Recombinant Human Fibronectin Fragment (C0352)促进慢病毒感细胞的效果图。在细胞培养容器表面分别包被BeyoNectin™和Competitor T，然后用Lenti-EF1α-mCherry (10^8TU/ml, 对照慢病毒) (C4019)分别感染Jurkat、K-562和HL-60细胞，48小时后通过流式细胞仪检测红色荧光表达测定细胞感染效率(Transduction)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
BeyoNectin™可增强多种细胞贴壁。BeyoNectin™可辅助细胞贴壁，维持良好生长状态，提高细胞生长效率，也可增加悬浮细胞单克隆筛选的效率。本产品促进悬浮细胞贴壁，防止细胞聚团的效果请参考图3。
图3. 碧云天BeyoNectin™ Recombinant Human Fibronectin Fragment (C0352)促进细胞贴壁的效果图。分别使用普通细胞培养皿(Non-treated)和BeyoNectin™包被的细胞培养皿(BeyoNectin™-treated)培养Jurkat悬浮细胞，使用显微镜观察细胞在0小时、2小时和24小时的贴壁效率，BeyoNectin™可使Jurkat悬浮细胞有效贴壁，防止细胞聚团。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
BeyoNectin™与CD3抗体等联用可增强体外T细胞的激活和扩增。近些年，重组人纤维连接蛋白片段已广泛用于T细胞受体工程化T细胞(T cell receptor-engineered T cells, TCR-T)和嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor T cells, CAR-T)的制备[2, 3]。与单独使用CD3抗体相比，同时使用重组人纤维连接蛋白片段后能更有效的刺激T细胞扩增，T细胞分化为记忆T细胞的能力也更强[4]。BeyoNectin™和Recombinant Anti-CD3 Antibody (OKT3)联用激活T细胞的效果请参考图4。
图4. 碧云天BeyoNectin™ Recombinant Human Fibronectin Fragment (C0352)增强T细胞激活的效果图。单独使用Recombinant Anti-CD3 Antibody (OKT3)，或同时使用BeyoNectin™和Recombinant Anti-CD3 Antibody (OKT3)，刺激TCR/CD3 Effector Cells (NFAT) 6小时，通过检测萤光素酶报告基因的表达情况评估T细胞激活效率。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
蛋白浓度(Concentration): 1mg/ml。
储存液(Storage buffer): 12.5mM Sodium citrate (pH6.2), 1.25% Sucrose。
对于96孔板，按照每孔使用0.1ml BeyoNectin™工作液进行包被，当BeyoNectin™工作液浓度为20μg/ml时，每1ml本产品，可以用于5块96孔板的包被；当BeyoNectin™工作液浓度为100μg/ml时，每1ml本产品，可以用于1块96孔板的包被。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| C0352-500μg | BeyoNectin™ rhFibronectin Fragment (1mg/ml) | 500μl |
| C0352-2mg | BeyoNectin™ rhFibronectin Fragment (1mg/ml) | 2ml |
| C0352-10mg | BeyoNectin™ rhFibronectin Fragment (1mg/ml) | 2ml×5 |
| — | 说明书 | 1份 |
-20ºC保存，一年有效。-80ºC保存，可以保存更长时间。
注意事项：必须使用表面未经处理的细胞培养容器(Non-treated tissue cell culture vessel)进行包被，不能使用表面处理的细胞培养容器(Treated tissue cell culture vessel)，即不能使用最常用的细胞培养器皿进行包被。表面处理的细胞培养容器结合BeyoNectin™的能力较低，因此会降低BeyoNectin™促进病毒的感染细胞的效率。推荐碧云天的96孔板(平底, 带盖) (FPT010/FPT011)、6厘米或9厘米培养皿(无菌) (FDSH106/FDSH109)。
经测试，反复冻融10次基本不影响BeyoNectin™的活性。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。