1. 把细胞培养在96孔培养板内，每孔加入200微升细胞培养液，设置适当的阴性对照和阳性对照，并给予药物刺激。
2. 至待检测时间点，如果培养液中的药物推测不会对后续检测产生干扰，直接加入20微升中性红染色液；如果培养液中的药物可能会对后续检测产生干扰，先用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次，随后加入200微升细胞培养液，并加入20微升中性红染色液。
3. 细胞培养箱内孵育2小时。注：对于细胞密度非常低，细胞代谢速率非常慢的情况，可以把孵育时间延长到3-4个小时。
4. 去除含有中性红染色液的细胞培养液，用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次。
5. 加入200微升中性红检测裂解液，室温摇床上裂解10分钟。在摇床上摇动可以促进样品的裂解。
6. 测定样品的A540，可以选择690nm作为参考波长。
图2. 本产品对L929细胞进行检测的效果图。实测数据会因细胞种类、细胞状态、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。
常见问题：1. 中性红染色液长期存放会产生沉淀。可以直接吸取染色液的上清液使用，也可以使用针头滤器等过滤去除沉淀后继续使用，不会影响使用效果。因为染色液中的中性红本来就是过量的。
2. 96孔板在细胞培养过程中会存在蒸发问题。在加入中性红染色液前，如果培养液存在明显的蒸发问题，会影响细胞的生长状态，并严重影响后续的检测结果。