使用说明:
1. MTT溶液的配制:用5ml MTT溶剂溶解25mg MTT,配制成5mg/ml的MTT溶液。配制后即可使用,或直接-20℃避光保存,也可以根据需要适当分装后-20℃避光保存。
2. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。按照实验需要,进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。
3. 每孔加入10微升MTT溶液,在细胞培养箱内继续孵育4小时。
4. 每孔加入100微升Formazan溶解液,适当混匀,在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察发现formazan全部溶解。通常37℃孵育3-4小时左右,紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少,溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多,溶解的时间会长一些,此时为加速溶解可以适当振摇数次。
5. 在570nm测定吸光度(可参考图2)。如无570nm滤光片,可以使用560-600nm的滤光片。