中文 | English
订货电话
400-1683301
800-8283301
电话订货时间:
工作日9:00-17:00
订货邮件
order@beyotime.com
订货QQ
4001683301
微信在线咨询
订单下载
碧云天订单.xls
信号转导> 荧光探针> 小分子荧光探针
Phosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒)
产品编号: S0192S
产品包装:200次
选择包装
价格: ¥ 2692.00
产品简介
使用说明
产品文件
相关产品
相关论文
产品问答
产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
S0192S Phosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒) 200次 2692.00元
S0192M Phosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒) 1000次 10358.00元

碧云天生产的Phosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒),也称磷酸根传感器检测试剂盒或Phosphate Fluorescent Assay Kit,是一种采用荧光基团标记的重组磷酸根结合蛋白,从而可以超高灵敏度检测溶液中的无机磷酸根或ATP酶(ATPase)、GTP酶(GTPase),磷酸酶(phosphatase)和磷酸二酯酶(phosphodiesterase)等酶活性的荧光检测试剂盒。

本产品对于无机磷酸根(PO43-)的检测灵敏度可以低至100nM。不仅适用于直接检测无机磷酸根的浓度,也被广泛用于检测能够直接或间接催化产生无机磷酸根的ATPase,GTPase,phosphatase和phosphodiesterase等酶的活性。

Phosphate Sensor是大肠杆菌(E.coli)磷酸根结合蛋白(phosphate-binding protein) A197C突变体重组蛋白用环境敏感型荧光基团MDCC (N-[2-(1-Maleimidyl)ethyl]-7-(diethylamino)coumarin-3-carboxamide)进行化学标记的产物。该无机磷酸根荧光探针(phosphate fluorescent probe)对无机磷酸根高度敏感,能和无机磷酸根快速并紧密(Kd~0.1μM)结合。无机磷酸根的结合会引起该传感器蛋白发生明显的构象变化,并导致荧光强度的明显增强。因此该荧光探针可以用于快速、超高灵敏度对溶液中的无机磷酸根进行实时动力学检测。

Phosphate Sensor与无机磷酸根结合后荧光信号显著增强。激发光波长为430nm,发射光波长为450nm的条件下,Phosphate Sensor与无机磷酸根结合后荧光信号增强最为显著,荧光信号升高约9倍(图1)。

图1. Phosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒)中Phosphate Sensor结合无机磷酸根前后的荧光信号差异。检测体系(20μl): 5μM Phosphate Sensor, 0或1mM Phosphate Standard,1X检测缓冲液。依次将10μl 0或2mM Phosphate Standard和10μl 10μM Phosphate Sensor加入384孔黑板(具体浓度的Phosphate Standard和Phosphate Sensor均由本试剂盒提供的试剂经1X检测缓冲液稀释获得)。采用荧光酶标仪在25℃ 430nm激发光条件下进行不同发射光波长的荧光测定,每组实验体系重复三次并取平均值。当反应体系中不加入无机磷酸根时,Phosphate Sensor在430nm激发光条件下的最大发射波长约为474nm;当反应体系中加入无机磷酸根时,Phosphate Sensor在430nm激发光条件下的最大发射波长约为465nm (图1A)。当激发光/发射光分别为430nm/450nm时,Phosphate Sensor在无机磷酸根结合前后的荧光信号差异最显著(图1B)。

本产品检测无机磷酸根的敏感范围约在100nM-5μM之间(图2),比传统的孔雀绿磷酸根检测法(Malachite green phosphate assay)敏感约100倍以上。

Phosphate Sensor对溶液中浓度低至100nM的无机磷酸根的结合即可导致明显的荧光增强,实测的EC50约为1.7μM (图2),不同检测条件的检测数据会略有差异。

图2. Phosphate Sensor Assay Kit (磷酸根荧光检测试剂盒)中Phosphate Sensor结合无机磷酸根的标准曲线。检测体系(20μl): 5μM Phosphate Sensor,1X检测缓冲液,0-1mM Phosphate Standard。依次将10μl 0-2mM Phosphate Standard和10μl 10μM Phosphate Sensor加入384孔黑板(具体浓度的Phosphate Standard和Phosphate Sensor均由本试剂盒提供的试剂经1X检测缓冲液稀释获得)。采用荧光酶标仪在25℃激发光/发射光波长分别为430nm/450nm条件下进行荧光测定,每组实验体系重复三次。利用GraphPad Prism软件中的“variable slope”模型[Y=Bottom+Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))]拟合出标准曲线。不同实验条件的检测数据会略有差异,图中数据仅供参考。

用途:无机磷酸根浓度的超灵敏度荧光检测,ATP酶(ATPase)、GTP酶(GTPase)、磷酸酶(Phosphatase)和磷酸二酯酶(Phosphodiesterase)等可以直接或间接催化产生无机磷酸根的酶的高灵敏度活性检测。

Phosphate Sensor来源:MDCC荧光标记的E.coli表达的重组蛋白,表达基因为E.coli phoS基因A197C突变体。

本产品在检测过程中操作简单,使用方便,通常10-30个样品可以在30-60分钟内测定完毕。

一个小包装或中包装的本产品,其中分别含有20nmol或100nmol的Phosphate Sensor,如果用于20μl检测体系,通常分别可以进行200或1000次检测。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
S0192S-1 Phosphate Sensor (100μM) 200μl
S0192S-2 10X检测缓冲液 2ml
S0192S-3 Phosphate Standard (10mM) 0.2ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
S0192M-1 Phosphate Sensor (100μM) 1ml
S0192M-2 10X检测缓冲液 10ml
S0192M-3 Phosphate Standard (10mM) 1ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃避光保存,至少一年有效。

注意事项:

由于Phosphate Sensor储存液中含有高浓度甘油,为减小操作误差,建议根据每次实验所需的量预先用1X检测缓冲液将一定量的Phosphate Sensor稀释成10μM或其它合适浓度备用。

请注意不同批次Phosphate Sensor浓度可能会有不同,使用时以收到产品的说明书和产品标签上的浓度为准。

使用荧光酶标仪检测时,为避免相邻孔之间的荧光信号干扰,推荐使用孔和孔之间不透光的384孔黑板。

某些表面有涂层的多孔板可能含有无机磷酸根,容易干扰检测体系。因此,建议使用表面未加涂层的384孔黑板进行检测。

由于不同荧光检测设备的灵敏度有所差异,实际检测过程中可以根据荧光信号的强弱适当调整检测体系中Phosphate Sensor的终浓度。

检测体系中须注意避免引入气泡,可以在检测之前对检测板进行离心或震荡处理。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.样品中无机磷酸根浓度的精确测定:
a.试剂的准备。
根据样品和标准品的数量,溶解10X检测缓冲液,用水配制适量的1X检测缓冲液。按照每个样品或标准品需要5μl 10μM Phosphate Sensor量,用1X检测缓冲液配制适量的10μM Phosphate Sensor。1X检测缓冲液配制后可以冻存并用于后续使用,10μM Phosphate Sensor配制后宜4℃或冰浴保存,并在当日使用,不宜冻存并用于后续使用。Phosphate Sensor的最佳浓度可根据实际检测效果进行适当调整。
b.标准品的准备。
取适量Phosphate Standard (10mM),用1X检测缓冲液稀释成不同浓度的标准品,例如2mM、1mM、0.5mM、0.25mM、0.125mM、62.5μM、31.3μM、15.6μM、7.8μM……3.9μM、1.95μM、0μM。标准品的浓度范围和浓度点可以根据实际检测效果适当调整。
c.样品的准备。
对于待检测的样品,根据预测的样品中的无机磷酸根的浓度,用1X检测缓冲液将样品稀释至无机磷酸根的浓度约在200nM-2μM范围,每个样品的体积不少于10μl。
d.标准品和样品的检测。
(a)参考下表设置反应体系。使用384孔黑板,先加入10μl 10μM Phosphate Sensor,再加入10μl不同浓度的上述Phosphate Standard溶液或待检测的样品,充分混匀后进行荧光测定。检测条件为25℃,激发光/发射光=430nm/450nm。为减小误差,每组实验体系最好能重复三次。
Reagent Standard Sample
Phosphate Sensor (10μM) 10μl 10μl
Phosphate Standard 10μl 0μl
待测样品 0μl 10μl
Total Volume 20μl 20μl
(b)利用GraphPad Prism软件中的“variable slope”模型[Y=Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogEC50-X)*HillSlope))]拟合出标准曲线,拟合之前需先将Phosphate浓度“X”转换成“log(X)”。根据标准曲线计算出样品中的无机磷酸根的浓度。
2.样品中催化生成无机磷酸根的酶活性检测。
a.终点法酶活性检测。
(a)参考文献资料,针对具体的酶,例如ATPase,GTPase,Phosphatase和phosphodiesterase等设置相应的酶反应体系。
(b)反应结束后,参考上述步骤1c,用1X检测缓冲液稀释样品至无机磷酸根浓度约在200nM-2μM范围,每个样品的体积不少于10μl。
(c)同上述步骤1,设置标准曲线,并进行标准品和样品的检测。
(d)根据样品和对照中检测出的无机磷酸根的浓度,和相应的酶活性定义,计算出样品中的酶活性。如果有必要可以检测样品的蛋白浓度,以计算出单位蛋白含量样品中的酶活性。
b.酶活性的动力学检测。
(a)参考文献资料,针对具体的酶,例如ATPase,GTPase,Phosphatase和phosphodiesterase等规划相应的酶反应体系。推荐反应体系的最终体积为20μl,并在384孔黑板中进行反应。
(b)在酶反应体系中加入Phosphate Sensor至终浓度为5μM。
(c)加入ATPase等酶的关键底物起始酶反应。
(d)每间隔适当时间进行荧光检测,激发光/发射光=430nm/450nm。
(e)根据样品和对照在不同时间点的荧光读数,以及参考步骤1进行的标准曲线检测结果,计算出在单位时间内样品中酶催化产生的无机磷酸根的量。然后再根据酶的活性定义,计算出样品中酶活性。如果有必要可以检测样品的蛋白浓度,以计算出单位蛋白含量样品中的酶活性。
物质安全数据单
输入右侧验证码点击下载:
更换校验码
质检证书
输入批号搜寻COA
搜索
相关产品请点击如下按钮:
使用本产品的文献:
购物车
会员
顶部