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核酸相关> RNA相关> 切割、合成、连接和修饰
Poly(U) Polymerase
产品编号: R7072M
产品包装:500U
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价格: ¥ 1598.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
R7072S Poly(U) Polymerase 100U 398.00元
R7072M Poly(U) Polymerase 500U 1598.00元
R7072L Poly(U) Polymerase 2kU 5098.00元

碧云天生产的Poly(U) Polymerase,即Poly(U)聚合酶,也称PolyU Polymerase或PolyU聚合酶,简称PUP,是由碧云天自主研发的PerfectProtein™技术平台表达、纯化获得的重组聚合酶。Poly(U) Polymerase能以不依赖模板的方式将来自UTP的UMP整合到底物RNA的3'末端,形成poly(U)尾;也可以不依赖模板的方式将来自ATP的AMP整合到底物RNA的3'末端,形成poly(A)尾,但该酶形成poly(U)尾的能力比形成poly(A)尾的能力强得多。如果反应中使用生物素等标记的UTP,则可实现对RNA的3'末端的生物素标记等[1]。

碧云天Poly(U) Polymerase对RNA 3'末端加Poly(U)尾的效果参考图1。

图1.碧云天Poly(U) Polymerase (R7072)和国外N公司的同类产品(Competitor)对RNA 3'末端加Poly(U)尾的效果图。在25µl反应体系中加入图中指定量的本产品或N公司的Poly(U) Polymerase,37ºC孵育1小时进行反应,65ºC加热20分钟进行失活,反应完毕后加入2X RNA Loading Buffer (R0215),95ºC孵育3分钟进行变性,随后进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的对RNA 3'末端加Poly(U)尾的效果。反应体系(25μl):50mM NaCl, 10mM Tris-HCl, 10mM MgCl2, 1mM DTT, pH7.9 @ 25ºC, 0.5mM UTP,人工合成的80pmol的16nt长度的RNA以及不同浓度的Poly(U) Polymerase。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

用途:RNA 3'端加Poly(U)尾或Poly(A)尾,然后用于克隆;用生物素或荧光修饰的UTP标记RNA;放射性标记RNA;对3'末端为2'氧甲基的RNA进行Poly(A)加尾;对进入真核细胞的RNA加尾从而研究其对RNA稳定性和翻译的影响。

来源:由大肠杆菌表达,表达基因为来自Schizosaccharomyces pombe Poly(U) Polymerase基因。

活性单位定义:One unit is defined as the amount of enzyme that incorporates 1nmol of UMP into RNA in a 50μl volume in 10 minutes at 37ºC.

纯度:不含DNase、RNase和磷酸酯酶。

酶储存溶液:10mM Tris-HCl (pH7.5 @ 25ºC), 100mM NaCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% (v/v) Glycerol.

失活或抑制:65ºC加热20分钟可使Poly(U) Polymerase失活。

10X Poly(U) Reaction Buffer:500mM NaCl, 100mM Tris-HCl, 100mM MgCl2, 10mM DTT, pH7.9 @ 25ºC.

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R7072S-1 Poly(U) Polymerase (2U/µl) 50µl
R7072S-2 10X Poly(U) Reaction Buffer 0.2ml
R7072S-3 UTP (10mM) 65μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7072M-1 Poly(U) Polymerase (2U/µl) 250µl
R7072M-2 10X Poly(U) Reaction Buffer 1ml
R7072M-3 UTP (10mM) 325μl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7072L-1 Poly(U) Polymerase (2U/µl) 1ml
R7072L-2 10X Poly(U) Reaction Buffer 4ml
R7072L-3 UTP (10mM) 1.3ml
说明书 1份
保存条件:

-20ºC保存,至少两年有效。

注意事项:

10X Poly(U) Reaction Buffer中不包含UTP。

Poly(U) Polymerase的用量主要影响目的产物的长度,可以根据所需目的产物的长度适当调整酶的用量,如果想得到长度较长的产物可以适当加大酶的用量或延长反应时间。

本产品中在使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

超纯水推荐使用BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.使用Poly(U) Polymerase对RNA 3'端加Poly(U)尾。
a.参考下表在冰浴中配制反应体系。
Component Volume
Ultrapure Water 18.45µl
10X Poly(U) Reaction Buffer 2.5µl
Single-stranded RNA (100µM) 0.8µl
UTP (10mM) 1.25µl
RNase Inhibitor (R0102) 1µl
Poly(U) Polymerase (2U/µl) 1µl
注:请把除Poly(U) Polymerase以外的组分充分混匀后再加入Poly(U) Polymerase,加入Poly(U) Polymerase后可以用枪吹打或轻轻Vortex混匀。
b.反应条件:37ºC孵育1小时。
c.终止反应:65ºC孵育20分钟并加入2X RNA Loading Buffer (R0215)。
2.其它应用请参考相关文献进行。
参考文献:
1.Kwak J E, Wickens M. RNA. 2007. 13(6).
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产品编号 产品名称 包装
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D7378-5ml ATP (100mM, Nuclease free) 5ml
D7379-250μl CTP (100mM, Nuclease free) 250μl
D7379-1ml CTP (100mM, Nuclease free) 1ml
D7379-5ml CTP (100mM, Nuclease free) 5ml
D7380-250μl GTP (100mM, Nuclease free) 250μl
D7380-1ml GTP (100mM, Nuclease free) 1ml
D7380-5ml GTP (100mM, Nuclease free) 5ml
D7381-250μl UTP (100mM, Nuclease free) 250μl
D7381-1ml UTP (100mM, Nuclease free) 1ml
D7381-5ml UTP (100mM, Nuclease free) 5ml
D7383-1ml NTP set (100mM each, Nuclease free) 4×250μl
D7385-500μl NTP Mix (10mM each, Nuclease free) 500μl
D7385-2ml NTP Mix (10mM each, Nuclease free) 2ml
D7387-250μl NTP Mix (25mM each, Nuclease free) 250μl
D7387-1ml NTP Mix (25mM each, Nuclease free) 1ml
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D7100M T4 Polynucleotide Kinase (3' phosphatase minus) 2000U
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R0081-5ml BeyoMag™ RNA Clean Magnetic Beads (RNA纯化磁珠) 5ml
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ST578 RNase A (10mg/ml) 1ml
ST579 RNase A (100mg/ml) 0.5ml
ST876-100ml BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) 100ml
ST876-500ml BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) 500ml
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