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核酸相关> RNA相关> 切割、合成、连接和修饰
E.coli Poly(A) Polymerase
产品编号: R7070XL
产品包装:10kU
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价格: ¥ 15428.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
R7070S E.coli Poly(A) Polymerase 100U 288.00元
R7070M E.coli Poly(A) Polymerase 500U 1138.00元
R7070L E.coli Poly(A) Polymerase 2.5kU 4556.00元
R7070XL E.coli Poly(A) Polymerase 10kU 15428.00元

碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase,即E. coli Poly(A)聚合酶,也称E. coli PAP、PAP酶、Poly(A)加尾酶或PolyA加尾酶,能以不依赖于模板的方式催化由ATP转化成的AMP添加到单链RNA的3’末端,以形成Poly(A)尾。E. coli Poly(A)聚合酶能以各种单链RNA作为底物RNA,但双链RNA及过短的寡核苷酸不推荐作为该反应的RNA底物,并且DNA不能作为该反应的底物。实测15nt合成的RNA完全可以作为E. coli Poly(A) Polymerase的底物,在ATP存在时催化形成Poly(A)尾的。E. coli Poly(A) Polymerase催化的Poly(A)加尾反应只能使用ATP,而不能使用ADP或dATP。另外,使用CTP和UTP时,其掺入量不足使用ATP时的5%;而使用GTP时,其完全不能添加到RNA的3'末端。

碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase对单链RNA加Poly(A)尾的效果参考图1。

图1. 碧云天生产的E. coli Poly(A) Polymerase与同类产品(Competitor)对单链RNA加Poly(A)尾的对比效果图。在20µl反应体系(50mM Tris-HCl, pH8.1, 250mM NaCl, 1mM ATP, 10mM MgCl2)中,加入人工合成的0.5µg 22nt的单链RNA,以及图中指定量的本产品或N公司(Competitor)的E. coli Poly(A) Polymerase,37℃孵育30min,65℃孵育20min终止反应。取出5μl反应后的产物,加入1μl 6X DNA Loading Buffer (D0071),95℃变性3min,然后进行含7M Urea的15%聚丙烯酰胺凝胶电泳。室温条件下用1X TBE作为电泳液,180V电泳90min,NA-Red (D0128) 1:1000稀释后室温染色30min,然后拍照观察。如图所示,本产品与N公司的产品相比,具有类似的对单链RNA加Poly(A)尾的效果。

用途:用放射性同位素标记的ATP或虫草素(cordycepin)标记RNA;为RNA添加Poly(A)尾,用于反转录后克隆或亲和纯化;增加mRNA的稳定性,从而提高转染至真核细胞中的RNA的翻译效率。

来源:重组E. coli菌株,携带克隆自大肠杆菌的Poly(A)聚合酶基因。

活性定义:One unit is defined as the amount of enzyme that will incorporate 1nmol of AMP into RNA in a 20µl volume in 10 minutes at 37℃.

纯度:不含DNase、RNase和磷酸酯酶。

酶储存液:20mM Tris-HCl (pH7.5, 25℃), 500mM NaCl, 1mM DTT, 1mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100.

10X Reaction Buffer:500mM Tris-HCl (pH8.1, 25℃), 2.5M NaCl, 100mM MgCl2.

失活或抑制:加入EDTA至终浓度为10mM,或65℃加热20min。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
R7070S-1 E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) 20µl
R7070S-2 10X PAP Reaction Buffer 50µl
R7070S-3 10mM ATP 50µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7070M-1 E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) 100µl
R7070M-2 10X PAP Reaction Buffer 250µl
R7070M-3 10mM ATP 250µl
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7070L-1 E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) 500µl
R7070L-2 10X PAP Reaction Buffer 1.25ml
R7070L-3 10mM ATP 1.25ml
说明书 1份

产品编号 产品名称 包装
R7070XL-1 E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) 2ml
R7070XL-2 10X PAP Reaction Buffer 5ml
R7070XL-3 10mM ATP 5ml
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存,至少两年有效。

注意事项:

10X PAP Reaction Buffer中不包含ATP。

E. coli Poly(A) Polymerase的用量主要影响目的产物的长度,可以根据所需目的产物的长度适当调整酶的用量,如果想得到长度较长的产物可以适当加大酶的用量或延长反应时间。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.参考下表在冰浴中设置反应体系。参考下表20μl反应体系中加Poly(A)尾的RNA底物量可以高达10μg,并且可根据实验需要按比例放大反应体系。在Poly(A)加尾反应中,加尾的长度取决于RNA 3’-OH末端的摩尔浓度、反应时间、酶量和ATP浓度。可以通过更改一个或多个因素来调整加尾的长度。按照如下的推荐反应体系,在37℃孵育30min,加Poly(A)尾长度可以超过100个碱基。
Reagent Volume Final Concentration
DEPC-treated Water (14.5-x)µl -
10X PAP Reaction Buffer 2µl 1X
10mM ATP 2µl 1mM
RNase Inhibitor (40U/µl) 0.5µl 1U/µl (Optional)
RNA xµl 0.05-0.5µg/µl
E. coli Poly(A) Polymerase (5U/µl) 1µl 0.25U/µl
Total Volume 20µl -
注1:由于涉及RNA操作,需要严格按照RNA操作的规范进行,避免RNase污染,相关试剂和耗材需要经过DEPC处理以去除RNase或者确保是RNase free的。
注2:用于加尾反应的RNA在使用前应进行适当的纯化,并溶解于nuclease free water中,且溶液中应不含EDTA和盐分。
注3:如果较难确保比较严格的RNase-free,推荐在上述反应体系中添加0.5µl RNase Inhibitor (R0102),以提高溶液中RNA的稳定性。
2.加尾反应:37℃孵育30min。
3.反应终止:加入EDTA至终浓度为10mM,或65℃加热20min以终止反应。
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D7178S BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒 20次
D7178M BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒 100次
D7178L BeyoRT™ III cDNA第一链合成试剂盒 500次
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