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RNase H
产品编号: D7089
产品包装: 100U
产品价格: 167.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7089 RNase H 100U 167.00元

      RNase H,即Ribonuclease H,中文名为核糖核酸酶H,是一种核糖核酸内切酶,可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H不能水解单链或双链DNA或RNA中的磷酸二酯键,即不能消化单链或双链DNA或RNA。
      特点:特异性消化DNA-RNA杂合链中的RNA,常用于cDNA第二链的合成。
      用途:DNA-RNA杂合链中去除RNA,例如cDNA第二条链合成前去除mRNA;通过互补的DNA序列实现对RNA的定点剪切;除去杂交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A);体外多腺苷酸化反应(polyadenylation reaction)产物研究。
      来源:E.coli MRE-600细胞。
      分子量:约18.4kDa(单体)。
      活性定义:37℃20分钟内,能够催化1nmol杂合双链中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定义为1个活性单位。
      活性检测条件:20mM Tris-HCl(pH7.8),40mM KCl,8mM MgCl2,1mM DTT,24μM[3H]-poly(A).poly(dT),
0.03mg/ml BSA ,4%(v/v)glycerol。
      纯度:不含DNA内切酶和外切酶,不含其它核糖核酸酶。
      酶储存溶液:25mM HEPES-KOH(pH8.0),50mM KCl,1mM DTT,1mM EDTA,0.1mg/ml BSA,50%(v/v)glycerol。
      Reaction Buffer(10X):200mM Tris-HCl(pH7.8),400mM KCl,80mM MgCl2,10mM DTT。
      失活或抑制:65℃加热10分钟可使RNase H失活。金属离子螯合剂和巯基封闭剂均能抑制RNase H活性。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7089-1 RNase H(5U/μl) 100U
D7089-2 Reaction Buffer(10X) 0.2ml
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项: 
      酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 

使用说明:
1. DNA-RNA杂合链中去除RNA:
a. 用反转录酶,例如BeyoRT M-MuLV反转录酶或BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂:

Reaction Buffer(10X) 2μl
无核酸酶去离子水 17.8μl
RNase H(5U/μl) 0.2μl

c. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
d. 37℃孵育1小时。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀,以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
说明:其他情况DNA-RNA杂合链中去除RNA的条件可以参考上述条件进行。RNase H反应的pH范围约在7.5-8.3均可。
2. 杂合链中RNA的去除和cDNA第二链的合成:
a. 用反转录酶,例如BeyoRT M-MuLV反转录酶(D7153)BeyoRT M-MuLV反转录酶(RNase H-)(D7159)BeyoRT cDNA第一链合成试剂盒(RNase H-)(D7166)合成cDNA第一条链,70℃孵育10分钟终止反应。
b. 在冰浴上向已经合成第一条链的20μl反应体系中依次加入如下试剂:

Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I 8μl
无核酸酶去离子水 68.8μl
RNase H(5U/μl) 0.2μl
DNA Polymerase I, E.coli 3μl(30U)

c. 按上述体系配好之后,轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀),随后离心沉淀液体。
d. 15℃孵育2小时。(注意:反应温度不能超过15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混匀,以终止反应。
f. 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA,也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(D0033)可以向碧云天订购。
注:Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I:500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃),100mM MgCl2,10mM DTT。
3. 其他用途请参考上述用途或相关文献资料进行。

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