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Thermolabile dsDNase
产品编号: D7078S
产品包装: 50次
产品价格: 228.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D7078S Thermolabile dsDNase 50次 228.00元

      碧云天生产的Thermolabile dsDNase,即热敏感性双链脱氧核糖核酸酶,是一种用于快速、安全地去除RNA样品中基因组DNA(genomic DNA, gDNA)污染的重组表达的热敏感性双链脱氧核糖核酸酶。本产品可特异性剪切双链DNA(double strand DNA, dsDNA)中的磷酸二酯键,产生带有5’-磷酸与3’-羟基末端的寡核苷酸的核酸内切酶。
      本产品对RNA或单链DNA如cDNA和引物几乎无酶切活性,在镁离子存在的情况下,本产品对dsDNA的酶切活性比对ssDNA的酶切活性约高5000倍。并且本产品55℃加热5分钟即可被失活,因此非常适合用于在反转录之前快速便捷地去除RNA样品中的基因组DNA污染。
      本产品在20-40℃保持高活性状态,比牛DNase I的活力约高30倍,但可通过55℃热处理5分钟而完全且不可逆地灭活。
      特点:dsDNA特异性,特异性消化双链DNA而对单链DNA及RNA无活性;热不稳定性,使用相对温和的55℃加热处理5分钟可使Thermolabile dsDNase不可逆失活;活性强,2分钟孵育即可将RNA样品中所含有的基因组DNA或1μg基因组DNA消化完毕(参靠图1)。

      图1. 碧云天生产的Thermolabile dsDNase的特异性及热敏感性检测效果图。A. 碧云天生产的Thermolabile dsDNase、同类产品(Competitor dsDNase)及DNase I (D7073)消化400bp双链DNA (dsDNA)或45nt单链DNA (ssDNA)的效果对比图。反应体系均为10μl,dsDNA与ssDNA总量均为400ng,反应条件为37°C孵育2min。图中可见Thermolabile dsDNase特异性消化dsDNA,而对ssDNA无活性,DNase I对于dsDNA和ssDNA没有选择性。B. 55℃孵育5min可使Thermolabile dsDNase完全失活。400ng长度约400bp的PCR产物,加入Thermolabile dsDNase后37℃孵育2min,或者先55℃孵育5min后再37℃孵育2min。

      用途:制备不含DNA的RNA样品;反转录前RNA样品中去除基因组DNA污染;体外T3、T7、SP6等RNA Polymerases催化的RNA合成后消化去除模板DNA。
      来源:Pichia pastoris重组表达Thermolabile dsDNase基因。
      分子量:43kDa
      纯度:不含其它DNA内切酶与外切酶活性,不含RNA酶活性。
      酶储存溶液:25mM Tris-HCl (pH7.5),2mM MgCl2,10mM NaCl,0.01%(v/v) Triton X-100,50%(v/v) glycerol。
      Reaction Buffer(10X):200mM Tris-HCl (pH8.3),60mM MgCl2
      失活或抑制:55℃加热5min可使Thermolabile dsDNase完全失活;金属离子螯合剂如EDTA、毫摩尔浓度的锌等金属离子、低于0.1%的SDS、高盐以及还原剂如DTT和巯基乙醇均可抑制Thermolabile dsDNase的酶活性。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D7078S-1 Thermolabile dsDNase 50μl
D7078S-2 Reaction Buffer (10X) 100μl
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本产品用于反转录反应前RNA样品中去除基因组DNA污染时,必须注意RNase-free的相关操作规范。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 使用本产品推荐反应体系为10μl。待处理的RNA样品中依次加入1μl的Thermolabile dsDNase和1μl Reaction Buffer (10X),补充RNase-free water至10μl,混匀后置于37℃水浴孵育2min,即可有效去除RNA样品中的基因组DNA污染或DNA模板等双链DNA。
2. 经过Thermolabile dsDNase处理的RNA样品,后续如果用于反转录,必须在55℃加热5min以充分灭活Thermolabile dsDNase。尽管Thermolabile dsDNase不会消化单链DNA,但单链的cDNA形成复杂的二级结构中含有双链时,还是有可能被Thermolabile dsDNase所识别并剪切的,因此在反转录前必须在55℃加热5min以充分灭活Thermolabile dsDNase。

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