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核酸相关> DNA标记和检测> 生物素标记与检测
化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒
产品编号: D3308
产品包装:1000cm2
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价格:¥1186.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D3308 化学发光法生物素标记核酸检测试剂盒 1000cm2 1186.00元
D3308B 封闭液(D3308专用) 380ml 117.00元
D3308W 洗涤液(5X, D3308专用) 250ml 117.00元

化学发光法生物素检测试剂盒(Chemiluminescent Biotin-labeled Nucleic Acid Detection Kit)是一种通过Streptavidin-HRP及后续的BeyoECL Moon试剂来实现化学发光检测Biotin标记核酸的检测试剂盒。适用于Southern blot、Northern blot、ribonuclease protection assay (RPA)或EMSA等实验中,采用生物素标记的DNA或RNA探针时的检测。本试剂盒不适用于生物素标记蛋白的检测。
本试剂盒同时还提供了封闭液、洗涤液等检测时所需的配套试剂。
本试剂盒采用了高质量的Streptavidin-HRP Conjugate,HRP和Streptavidin共价交联的比例大于3,这样比采用Streptavidin和Biotin-HRP conjugate两种试剂进行检测要更方便,并且灵敏度更高。
采用了非特异性结合比avidin更低的strepatavidin,使检测结果背景更低灵敏度更高。
本试剂盒没有提供生物素探针标记相关的试剂,生物素标记的DNA探针或EMSA探针的制备可以相应地使用碧云天生产的生物素3'末端DNA标记试剂盒(D3106)EMSA探针生物素标记试剂盒(GS008)
本试剂盒可以用于检测至少10块10 x 10cm有生物素标记EMSA探针的膜,即共1000cm2
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D3308-1 BeyoECL Moon A液 55ml
D3308-2 BeyoECL Moon B液 55ml
D3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate 100μl
D3308-4 封闭液 380ml
D3308-5 洗涤液(5X) 250ml
D3308-6 检测平衡液 250ml
说明书 1份

保存条件:
D3308-3 Streptavidin-HRP Conjugate在-20℃保存,其余可4℃保存。如果长期不用,整个试剂盒可-20℃保存,-20℃可以保存更长时间。
注意事项:
需自备带正电荷尼龙膜,以及凝胶电泳时所需的相关试剂。带正电荷尼龙膜(FFN10/FFN11/FFN13/FFN15)
BeyoECL Moon A液和B液均对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 在使用Biotin标记探针的情况下,完成Southern、Northern杂交及后续洗涤后,或RPA的转膜和交联后,或EMSA的转膜和交联后,可以使用本试剂盒开始检测。下面的检测过程中溶液的用量是用于一片10x10cm膜的量。如果膜较大或较小,各溶液的用量可以按比例放大或缩小。
2. 37-50℃水浴溶解封闭液和洗涤液。
注意:封闭液和洗涤液必须完全溶解后方可使用,封闭液和洗涤液可以在室温至50℃之间使用,但必须确保这两种溶液中均无沉淀产生,在冬天需特别注意。
3. 取一合适的容器加入15ml封闭液,再放入交联过的含有样品的尼龙膜。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
4. 取7.5μl Streptavidin-HRP Conjugate加入到15ml封闭液中(1:2000稀释),混匀备用。
5. 去除封闭液,加入上一步中配制的15ml含有Streptavidin-HRP Conjugate的封闭液。在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动15分钟。
6. 取25ml 洗涤液(5X),加入100ml重蒸水或Milli-Q级纯水,混匀配制成125ml洗涤液。
7. 将尼龙膜转移至另一装有15-20ml洗涤液的容器内,漂洗1分钟。
8. 去除洗涤液,加入15-20ml洗涤液,在侧摆摇床或水平摇床缓慢上洗涤5分钟。
9. 重复步骤8三次(共洗涤四次),每次洗涤时间均约为5分钟。
10. 将尼龙膜转移至另一装有20-25ml检测平衡液的容器内,在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动5分钟。
11. 取5ml BeyoECL Moon A液和5ml BeyoECL Moon B液混匀,配制成BeyoECL Moon工作液。注意:BeyoECL Moon工作液必须现配现用。说明:从本步骤起操作方法和注意事项同Western实验的荧光检测。
12. 取出尼龙膜,用吸水纸吸去过多液体。立即将膜的样品面向上,放置到处于水平桌面上的洁净容器内或保鲜膜上。
13. 在尼龙膜的表面小心加上步骤11配制好的共10ml BeyoECL Moon工作液,使工作液完全覆盖尼龙膜。室温放置2-3分钟。
14. 取出尼龙膜,用吸水纸吸去过多液体。将尼龙膜放在两片保鲜膜或其它适当的透光薄膜中间,并固定于压片暗盒(也称片夹)内。
15. 用X光片压片1-5分钟。可以先压片1分钟,立即显影定影,然后根据结果再调整压片时间;也可以直接分别压片30秒、1、3、5分钟或更长时间,然后一起显影定影观察结果。

常见问题:
1. 背景较高。
可能是由于封闭液或洗涤液中出现沉淀或混浊。解决方法是参考使用说明,加热封闭液和洗涤液使封闭液和洗涤液完全溶解。
2. 出现斑点状背景。
可能是由于过长时间存放导致Streptavidin-HRP Conjugate中出现沉淀,解决方法是12000-14000g离心1分钟再吸取近液面的Streptavidin-HRP Conjugate。转膜时有气泡也会导致斑点状背景产生,解决方法是转膜时胶、膜、滤纸之间确保没有气泡。
3. 没有条带或信号很弱。
A. 探针标记效率太低,解决方法是检测探针标记效率,确保探针的标记效率较高。
B. 探针用量不足或样品量不足,解决方法是加大探针用量或加大样品用量。
C. 样品中待检测的核酸降解,解决方法是检测待检测的核酸样品是否出现降解,如降解则须制备新的样品。
D. 转膜效果不佳,解决方法是检查转膜的方法和步骤,最好使用预染的标准品作为转膜的对照。
E. 选择了不适当的膜,尽管不少情况下硝酸纤维素膜也可以完成检测,请优先选择带正电荷的尼龙膜。
F. 检测过程中膜干掉了,解决方法是确保检测过程中膜可以被液体覆盖或始终保持湿润。
G. 没有交联或交联效果不佳,解决方法是进行适当的交联,如果交联效果不佳则须检测交联的效率。
H. 洗涤液(5X)没有稀释就直接使用,请把洗涤液(5X)稀释至1X后再使用。
I. X光片曝光时间不足,解决方法是适当延长曝光时间。

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使用本产品的文献:
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