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核酸相关> 菌种与质粒> 真核载体
Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对
产品编号: D3043S
产品包装:各1μg
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价格: ¥ 1776.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D3043S Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对 各1μg 1776.00元
D3043M Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对 各100μg 2338.00元

碧云天自行研发生产的Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(Positive Control Plasmids Pair for Flag&HA Co-IP)包含pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-p53两种质粒,可以用于在哺乳动物细胞中表达N端带有3X Flag标签的人源LTA和HA标签的p53融合蛋白。因为p53和LTA蛋白间具有较强的相互作用,本质粒对可作为共转染细胞免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)的阳性对照使用,也可以单独转染细胞作为免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的阳性对照使用。

免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白与蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用实验技术,通过使用特异性抗体和可结合抗体的介质(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠),或直接使用偶联特异性抗体的介质(如琼脂糖凝胶或磁珠),然后通过离心或磁力从溶液中分离出抗原和抗体复合物,从而将目标蛋白质从复杂样品中分离出来,随后可以用于Western印迹检测或质谱分析等[1-2]。

pCMV-3X Flag-LTA质粒表达LTA。LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen),也称SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1),全长708氨基酸,分子量为81.6kDa,是一种六聚体蛋白。当LTA单独表达时能诱导静止细胞的增殖和转化,可以诱导实验动物肿瘤的形成,为研究DNA复制和细胞转化提供了非常有用的模型[3]。

pCMV-HA-p53质粒表达p53。p53中文名为细胞肿瘤抗原p53 (Cellular tumor antigen p53),全长393氨基酸,理论分子量为43.7kDa,实际分子量约为53kDa,是调控细胞周期的重要转录因子,主要功能包括调节细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因组稳定性和抑制肿瘤血管生成等,野生型的p53是一个重要的抑癌基因[4]。

本质粒对均含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,均带有氨苄青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性。

本质粒对用于磁珠法免疫共沉淀的效果参考图1A,用于琼脂糖凝胶法免疫共沉淀的效果参考图1B。

图1. 碧云天的Flag&HA Co-IP阳性对照质粒对(D3043)用于免疫共沉淀的效果图。图A使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) (P2181)HA标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) (P2185),图B使用了Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) (P2202)HA标签蛋白免疫沉淀试剂盒(琼脂糖凝胶法) (P2206)。293T细胞(人胚肾细胞)单独或共转染pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-p53质粒36小时后,使用Western及IP细胞裂解液(P0013)裂解。泳道1为小鼠IgG磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品,为免疫共沉淀的阴性对照;泳道2、3和4为磁珠或琼脂糖凝胶免疫沉淀后洗脱的样品,其中图A是经3X Flag Peptide或HA Peptide洗脱后的样品,图B是经SDS-PAGE Sample Loading Buffer洗脱后的样品,从泳道4可观察到共转染的Flag-LTA与HA-p53可以相互作用。Input即全细胞裂解液(Total cell lysate)。Western印迹成像由BeyoImager™ 600化学发光成像系统完成(EI600)。实际结果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。

推荐使用的测序引物序列如下:

CMV-F primer: 5' -CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'

BGH-R primer: 5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'

pCMV-3X Flag-LTA和pCMV-HA-p53的全序列信息:D3043-1 pCMV-3X Flag-LTA全序列.txtD3043-2 pCMV-HA-p53全序列.txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D3043S-1 pCMV-3X Flag-LTA 1μg
D3043S-2 pCMV-HA-p53 1μg
说明书 1份
产品编号 产品名称 包装
D3043M-1 pCMV-3X Flag-LTA 100μg
D3043M-2 pCMV-HA-p53 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本质粒对仅经过测序、免疫沉淀和免疫共沉淀验证,未经过功能性验证。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.25µg/µl,共400µl。可以直接用于转染细胞。
参考文献:
1.Lee C. Methods Mol Biol. 2007. 362:401-406.
2.Gevaert K, Vandekerckhove J. Electrophoresis. 2000. 21:1145-1154.
3.Xiao CY, Jans P, Jans DA. FEBS Lett. 1998. 440(3):297-301.
4.Levine AJ. Cell. 1997. 88(3):323-331.
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P2181 Flag标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) 20-100/100-500次
P2185 HA标签蛋白免疫沉淀试剂盒(磁珠法) 20-100/100-500次
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AF2305 HA Tag Rabbit Monoclonal Antibody 50μl
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