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pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc
产品编号: D2943-100µg
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D2943-1µg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc 1µg 888.00元
D2943-100µg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc 100µg 1129.00元

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达C端带有Myc标签(EQKLISEEDL)的新冠病毒(SARS-CoV-2) 核衣壳(Nucleocapsid, N)蛋白,可以使用抗Myc标签的抗体来识别N蛋白的表达,或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达,质粒为氨苄青霉素抗性。

N蛋白是冠状病毒的四个结构蛋白之一,由N基因编码,为核衣壳磷酸蛋白(nucleocapsid phosphoprotein),是冠状病毒的主要结构蛋白,也是冠状病毒编码蛋白中表达丰度最高的蛋白。N蛋白在病毒的组装、释放以及病毒的致病性方面发挥重要作用。冠状病毒N蛋白功能相对保守,包含两个结构独立的RNA结合结构域:N端RNA结合结构域(N-terminal RNA binding domain,NTD)和C端结构域(C-terminal domain,CTD),中间还有一个丝氨酸和精氨酸富集的连接区(serine and arginine linker region, SR linker)。冠状病毒的N蛋白能与病毒RNA紧密结合,通过螺旋堆积将RNA包装,从而保护病毒的基因组RNA。在病毒感染过程中,N蛋白是所有结构蛋白中诱导免疫反应最强烈的蛋白,由于其分子量小,没有糖基化修饰,易于蛋白表达纯化,因此常作为冠状病毒血清学检查最为合适的抗原。

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 232-819
T7 promoter and T7 primer binding site 863-882
Multiple cloning site 895-922
N protein 923-2179
Myc-tag 2180-2209
BGH pA 2250-2474
f1 origin of ss-DNA replication 2520-2948
SV40 promoter 2953-3296
Neomycin resistance ORF 3358-4152
SV40 polyA signal 4326-4456
pUC origin 4839-5509
Ampicillin resistance ORF 5654-6650
bla promoter 6549-6555

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒(6650bp)的图谱如下:

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2943 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc.pdf

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc)包括:

AgeI AleI AscI AsiSI BaeI BamHI BlpI
BsgI BsiWI BsmBI BspDI BspEI BsrGI BstEII
Bsu36I ClaI EcoNI EcoRV Esp3I FseI HpaI
NotI PacI PmlI PpuMI PshAI SacII SbfI
SfiI SgrAI SrfI SwaI

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc)包括:

Acc65I G`GTAC,C 917 NarI GG`CG,CC 3486
AfeI AGC|GCT 1852 NheI G`CTAG,C 895
AflII C`TTAA,G 908 NruI TCG|CGA 208
AhdI GACNN,N`NNGTC 5727 PaeR7I C`TCGA,G 1122
ApaI G,GGCC`C 2223 PciI A`CATG,T 4837
BbvCI CC`TCA,GC 1677 PflMI CCAN,NNN`NTGG 1277
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 6232 PluTI G,GCGC`C 3489
BmgBI CAC|GTC 1751 PspOMI G`GGCC,C 2219
BmtI G,CTAG`C 899 PspXI VC`TCGA,GB 1122
BsaBI GATNN|NNATC 3345 PvuI CG,AT`CG 6097
BseRI GAGGAG(N)8,NN` 3272 RsrII CG`GWC,CG 4002
BsmI GAATG,CN` 4406 SacI G,AGCT`C 818
BssHII G`CGCG,C 3883 ScaI AGT|ACT 6207
BstBI TT`CG,AA 4168 SexAI A`CCWGG,T 3043
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 1936 SfoI GGC|GCC 3487
BstZ17I GTA|TAC 4458 SmaI CCC|GGG 3299
CspCI ,NN` (N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 626 SnaBI TAC|GTA 590
DraIII CAC,NNN`GTG 2753 SpeI A`CTAG,T 249
EagI C`GGCC,G 3392 SspI AAT|ATT 6531
Eco53kI GAG|CTC 816 StuI AGG|CCT 3275
EcoO109I RG`GNC,CY 2219 TspMI C`CCGG,G 3297
EcoRI G`AATT,C 1200 XbaI T`CTAG,A 2213
KasI G`GCGC,C 3485 XcmI CCANNNN,N`NNNNTGG 1775
KpnI G,GTAC`C 921 XhoI C`TCGA,G 1122
MluI A`CGCG,T 228 XmaI C`CCGG,G 3297
MscI TGG|CCA 3568

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒中推荐使用的测序引物序列如下:

pcDNA3.1 primer (829-848): 5'- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3'

BGH pA primer (2244-2261): 5'- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3'

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc的全序列信息: D2943 pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc序列.txt

pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒转染HEK293T细胞后的表达效果请参考图1:

图1:Western blot实验检测SARS-CoV-2 N基因在HEK293T细胞的表达。1.转染pcDNA3.1空载质粒;2.转染pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒。使用碧云天Lipo8000™转染试剂(C0533)将2µg pcDNA3.1或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc质粒转染六孔板中密度为80%左右的HEK293T细胞,37℃恒温培养48h后,弃掉孔内培养液,PBS洗涤三遍后加入150µl Western及IP细胞裂解液(P0013)充分裂解,4℃离心,取上清用BCA法测蛋白浓度,然后经浓度4-20%的预制胶(P0524)电泳,每孔蛋白总量20µg,转膜、封闭后使用1:1000稀释的Myc抗体(AM926)室温孵育1h,洗涤后1:1000稀释的二抗(A0192)室温孵育1h,最后经BeyoELC Star(P0018AS)化学发光,并使用BeyoImager™ 600化学发光成像系统(EI600)拍照记录。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2943-1μg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc 1μg
D2943-100μg pcDNA3.1-SARS-CoV-2-N-Myc 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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