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核酸相关> 菌种与质粒> 真核载体
pCMV-mCherry-GFP-LC3B
产品编号: D2816-1μg
产品包装: 1μg
产品价格: 888.00元
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D2816-1μg pCMV-mCherry-GFP-LC3B 1μg 888.00元

pCMV-mCherry-GFP-LC3B是碧云天研发的在哺乳动物细胞中表达红色mCherry和绿色GFP双标签的人源LC3B融合蛋白的质粒。该质粒含有CMV启动子,为卡那霉素抗性,转染后能够在靶细胞中高效表达带有红色荧光蛋白mCherry和绿色荧光蛋白GFP双重标签的LC3B的融合蛋白,呈现明亮的红色和绿色荧光,可以用于细胞自噬(autophagy)的研究。本质粒转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达融合蛋白的细胞株。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族,其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止,LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白,在蛋白合成后,被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白,从而暴露出C端的甘氨酸,人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中,其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程,以ATG7为E1样激活酶(E1-like activating enzyme),以ATG3为E2样连接酶(E2-like conjugation enzyme),以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶(E3-like ligase),在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同,LC3B II定位于自噬体(autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后,自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切,而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大,但由于其极强的疏水性,在SDS-PAGE电泳时,LC3B II比LC3B I迁移得更快,其表观分子量分别为14kD和16kD。
自噬(Autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关,在饥饿等不利的环境条件下,细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分,为细胞的生存提供能量及原材料,促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用,自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。
自噬小体在与溶酶体融合过程中,溶酶体内的酸性环境会导致GFP荧光淬灭,这为追踪GFP-LC3B的细胞定位增加了难度。mCherry是一种来自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的单体红色荧光蛋白,当其与GFP进行LC3B的共同标记时,在GFP被溶酶体酸性环境所淬灭的情况下,可以发出红色荧光的mCherry因为其卓越的稳定性而被保留。因此,通过融合表达mCherry-GFP-LC3B蛋白,可以非常有效地追踪自噬过程。
pCMV-mCherry-GFP-LC3B质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
mCherry 698-1405
GFP 1412-2125
LC3B 2138-2515
T7 promoter and T7 primer binding site 2618-2639
SV40 polyA signal 2651-3034
f1 origin of ss-DNA replication 3172-3467
bla promoter 3501-3625
SV40 promoter 3465-3983
Neomycin/kanamycin resistance ORF 4018-4809
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 4810-5268
pUC origin 5397-6064

pCMV-mCherry-GFP-LC3B质粒(6116bp)的图谱如下:

pCMV-mCherry-GFP-LC3B表达基因的详细图谱如下:

NotI SmaI mCherry
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTATG
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGATAC
701 GTAAGCAAGG GCGAGGAGGA TAACATGGCC ATCATCAAGG AGTTCATGCG
CATTCGTTCC CGCTCCTCCT ATTGTACCGG TAGTAGTTCC TCAAGTACGC
751 CTTCAAGGTG CACATGGAGG GCTCCGTGAA CGGCCACGAG TTCGAGATCG
GAAGTTCCAC GTGTACCTCC CGAGGCACTT GCCGGTGCTC AAGCTCTAGC
801 AGGGCGAGGG CGAGGGCCGC CCCTACGAGG GCACCCAGAC CGCCAAGCTG
TCCCGCTCCC GCTCCCGGCG GGGATGCTCC CGTGGGTCTG GCGGTTCGAC
851 AAGGTGACCA AGGGTGGCCC CCTGCCCTTC GCCTGGGACA TCCTGTCCCC
TTCCACTGGT TCCCACCGGG GGACGGGAAG CGGACCCTGT AGGACAGGGG
901 TCAGTTCATG TACGGCTCCA AGGCCTACGT GAAGCACCCC GCCGACATCC
AGTCAAGTAC ATGCCGAGGT TCCGGATGCA CTTCGTGGGG CGGCTGTAGG
951 CCGACTACTT GAAGCTGTCC TTCCCCGAGG GCTTCAAGTG GGAGCGCGTG
GGCTGATGAA CTTCGACAGG AAGGGGCTCC CGAAGTTCAC CCTCGCGCAC
1001 ATGAACTTCG AGGACGGCGG CGTGGTGACC GTGACCCAGG ACTCCTCCCT
TACTTGAAGC TCCTGCCGCC GCACCACTGG CACTGGGTCC TGAGGAGGGA
1051 GCAGGACGGC GAGTTCATCT ACAAGGTGAA GCTGCGCGGC ACCAACTTCC
CGTCCTGCCG CTCAAGTAGA TGTTCCACTT CGACGCGCCG TGGTTGAAGG
1101 CCTCCGACGG CCCCGTAATG CAGAAGAAGA CCATGGGCTG GGAGGCCTCC
GGAGGCTGCC GGGGCATTAC GTCTTCTTCT GGTACCCGAC CCTCCGGAGG
1151 TCCGAGCGGA TGTACCCCGA GGACGGCGCC CTGAAGGGCG AGATCAAGCA
AGGCTCGCCT ACATGGGGCT CCTGCCGCGG GACTTCCCGC TCTAGTTCGT
1201 GAGGCTGAAG CTGAAGGACG GCGGCCACTA CGACGCTGAG GTCAAGACCA
CTCCGACTTC GACTTCCTGC CGCCGGTGAT GCTGCGACTC CAGTTCTGGT
1251 CCTACAAGGC CAAGAAGCCC GTGCAGCTGC CCGGCGCCTA CAACGTCAAC
GGATGTTCCG GTTCTTCGGG CACGTCGACG GGCCGCGGAT GTTGCAGTTG
1301 ATCAAGTTGG ACATCACCTC CCACAACGAG GACTACACCA TCGTGGAACA
TAGTTCAACC TGTAGTGGAG GGTGTTGCTC CTGATGTGGT AGCACCTTGT
1351 GTACGAACGC GCCGAGGGCC GCCACTCCAC CGGCGGCATG GACGAGCTGT
CATGCTTGCG CGGCTCCCGG CGGTGAGGTG GCCGCCGTAC CTGCTCGACA
GFP
1401 ACAAGGCTAG CATGAGCAAG GGAGAAGAAC TCTTTACTGG TGTTGTCCCA
TGTTCCGATC GTACTCGTTC CCTCTTCTTG AGAAATGACC ACAACAGGGT
1451 ATTCTGGTTG AGCTGGATGG TGATGTGAAT GGCCACAAAT TCTCTGTGTC
TAAGACCAAC TCGACCTACC ACTACACTTA CCGGTGTTTA AGAGACACAG
1501 TGGTGAAGGT GAAGGAGATG CAACTTATGG AAAGCTGACT CTGAAGTTCA
ACCACTTCCA CTTCCTCTAC GTTGAATACC TTTCGACTGA GACTTCAAGT
1551 TTTGTACAAC AGGAAAGCTG CCAGTGCCTT GGCCAACTCT GGTGACCACC
AAACATGTTG TCCTTTCGAC GGTCACGGAA CCGGTTGAGA CCACTGGTGG
1601 CTGACTTATG GTGTTCAATG TTTCAGCAGG TACCCTGACC ACATGAAGCA
GACTGAATAC CACAAGTTAC AAAGTCGTCC ATGGGACTGG TGTACTTCGT
1651 GCATGACTTC TTTAAATCTG CAATGCCAGA AGGTTATGTT CAGGAGAGGA
CGTACTGAAG AAATTTAGAC GTTACGGTCT TCCAATACAA GTCCTCTCCT
1701 CAATCTTCTT TAAGGATGAT GGAAATTATA AGACAAGGGC AGAAGTGAAG
GTTAGAAGAA ATTCCTACTA CCTTTAATAT TCTGTTCCCG TCTTCACTTC
1751 TTTGAAGGTG ATACACTGGT TAACAGAATT GAGCTGAAAG GCATTGATTT
AAACTTCCAC TATGTGACCA ATTGTCTTAA CTCGACTTTC CGTAACTAAA
1801 TAAGGAAGAT GGAAACATTC TGGGTCACAA GCTGGAGTAC AACTATAATT
ATTCCTTCTA CCTTTGTAAG ACCCAGTGTT CGACCTCATG TTGATATTAA
1851 CTCACAATGT TTACATTATG GCAGATAAGC AGAGGAATGG AATTAAGGCT
GAGTGTTACA AATGTAATAC CGTCTATTCG TCTCCTTACC TTAATTCCGA
1901 AATTTCAAGA TTAGACACAA CATTGAGGAT GGATCTGTCC AACTGGCAGA
TTAAAGTTCT AATCTGTGTT GTAACTCCTA CCTAGACAGG TTGACCGTCT
1951 CCATTACCAG CAGAACACCC CTATTGGTGA TGGCCCAGTT CTCCTCCCAG
GGTAATGGTC GTCTTGTGGG GATAACCACT ACCGGGTCAA GAGGAGGGTC
2001 ATAATCACTA TCTCAGCACT CAATCTGCTC TGTCCAAAGA CCCTAATGAG
TATTAGTGAT AGAGTCGTGA GTTAGACGAG ACAGGTTTCT GGGATTACTC
2051 AAAAGAGACC ACATGGTCCT CCTGGAGTTT GTGACAGCAG CAGGAATTAC
TTTTCTCTGG TGTACCAGGA GGACCTCAAA CACTGTCGTC GTCCTTAATG
LC3B
2101 TCTGGGAATG GATGAGCTGT ACAAGGGAGG TGGATCCATG CCGTCGGAGA
AGACCCTTAC CTACTCGACA TGTTCCCTCC ACCTAGGTAC GGCAGCCTCT
2151 AGACCTTCAA GCAGCGCCGC ACCTTCGAAC AAAGAGTAGA AGATGTCCGA
TCTGGAAGTT CGTCGCGGCG TGGAAGCTTG TTTCTCATCT TCTACAGGCT
2201 CTTATTCGAG AGCAGCATCC AACCAAAATC CCGGTGATAA TAGAACGATA
GAATAAGCTC TCGTCGTAGG TTGGTTTTAG GGCCACTATT ATCTTGCTAT
2251 CAAGGGTGAG AAGCAGCTTC CTGTTCTGGA TAAAACAAAG TTCCTTGTAC
GTTCCCACTC TTCGTCGAAG GACAAGACCT ATTTTGTTTC AAGGAACATG
2301 CTGACCATGT CAACATGAGT GAGCTCATCA AGATAATTAG AAGGCGCTTA
GACTGGTACA GTTGTACTCA CTCGAGTAGT TCTATTAATC TTCCGCGAAT
2351 CAGCTCAATG CTAATCAGGC CTTCTTCCTG TTGGTGAACG GACACAGCAT
GTCGAGTTAC GATTAGTCCG GAAGAAGGAC AACCACTTGC CTGTGTCGTA
2401 GGTCAGCGTC TCCACACCAA TCTCAGAGGT GTATGAGAGT GAGAAAGATG
CCAGTCGCAG AGGTGTGGTT AGAGTCTCCA CATACTCTCA CTCTTTCTAC
2451 AAGATGGATT CCTGTACATG GTCTATGCCT CCCAGGAGAC GTTCGGGATG
TTCTACCTAA GGACATGTAC CAGATACGGA GGGTCCTCTG CAAGCCCTAC
HindIII EcoRI EcoRV SalI BglII
2501 AAATTGTCAG TGTAAAGCTT CTGCAGGAAT TCGATATCGT CGACAGATCT
TTTAACAGTC ACATTTCGAA GACGTCCTTA AGCTATAGCA GCTGTCTAGA
XhoI XbaI SpeI ApaI
2551 CTCGAGTCTA GAACTAGTGG GCCCGGTACC TTAATTAATT AAGGTACCAG
GAGCTCAGAT CTTGATCACC CGGGCCATGG AATTAATTAA TTCCATGGTC

pCMV-mCherry-GFP-LC3B中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-mCherry-GFP-LC3B)包括:

AclI AfeI AflII AgeI AscI AsiSI BcgI
BlpI BmgBI BsiWI BspEI BspQI BssHII BstZ17I
EarI EcoNI FseI NruI PmeI PmlI PpuMI
PshAI PspXI SapI ScaI SwaI

pCMV-mCherry-GFP-LC3B中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-mCherry-GFP-LC3B once)包括:

NdeI CA`TA,TG 240 AccI GT`MK,AC 2540
SnaBI TAC|GTA 346 BglII A`GATC,T 2545
SacII CC,GC`GG 660 PaeR7I C`TCGA,G 2551
NotI GC`GGCC,GC 668 XhoI C`TCGA,G 2551
TspMI C`CCGG,G 680 XbaI T`CTAG,A 2557
XmaI C`CCGG,G 680 SpeI A`CTAG,T 2563
SmaI CCC|GGG 682 PspOMI G`GGCC,C 2569
SrfI GCCC|GGGC 682 ApaI G,GGCC`C 2569
AhdI GACNN,N`NNGTC 891 PvuI CG,AT`CG 2649
SbfI CC,TGCA`GG 1049 BclI T`GATC,A 2805
Bpu10I CC`TNA,GC 1236 MfeI C`AATT,G 2898
BbvCI CC`TCA,GC 1236 BtsI GCAGTG,NN` 2985
BsgI GTGCAG(N)14,NN` 1290 MluI A`CGCG,T 3034
SgrAI CR`CCGG,YG 1379 DraIII CAC,NNN`GTG 3261
XcmI CCANNNN,N`NNNNTGG 1383 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 3918
XmnI GAANN|NNTTC 2153 BspDI AT`CG,AT 3986
HindIII A`AGCT,T 2515 ClaI AT`CG,AT 3986
EcoRI G`AATT,C 2527 RsrII CG`GWC,CG 4662
EcoRV GAT|ATC 2535 PciI A`CATG,T 6064
SalI G`TCGA,C 2539

pCMV-mCherry-GFP-LC3B质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
T3 primer (620-639): 5´- AATTAACCCTCACTAAAGGG-3´
T7 primer (2618-2639): 5´-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3´
pCMV-mCherry-GFP-LC3B的全序列信息请参考碧云天网站上该质粒的信息。
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2816-1μg pCMV-mCherry-GFP-LC3B 1μg
D2816-100μg pCMV-mCherry-GFP-LC3B 100μg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
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产品编号 产品名称 包装
D2602-1μg pCMV-Blank 1μg
D2602-100μg pCMV-Blank 100μg
D2621-1μg pCMV-C-BFP (蓝色荧光蛋白) 1μg
D2621-100μg pCMV-C-BFP (蓝色荧光蛋白) 100μg
D2623-1μg pCMV-C-CFP (青色荧光蛋白) 1μg
D2623-100μg pCMV-C-CFP (青色荧光蛋白) 100μg
D2624-1μg pCMV-C-DsRed (红色荧光蛋白) 1μg
D2624-100μg pCMV-C-DsRed (红色荧光蛋白) 100μg
D2626-1μg pCMV-C-EGFP (绿色荧光蛋白) 1μg
D2626-100μg pCMV-C-EGFP (绿色荧光蛋白) 100μg
D2628-1μg pCMV-C-mCherry (红色荧光蛋白) 1μg
D2628-100μg pCMV-C-mCherry (红色荧光蛋白) 100μg
D2630-1μg pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) 1μg
D2630-100μg pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) 100μg
D2632-1μg pCMV-C-Flag 1μg
D2632-100μg pCMV-C-Flag 100μg
D2639-1μg pCMV-C-HA 1μg
D2639-100μg pCMV-C-HA 100μg
D2650-1μg pCMV-C-His 1μg
D2650-100μg pCMV-C-His 100μg
D2672-1μg pCMV-C-Myc 1μg
D2672-100μg pCMV-C-Myc 100μg
D2701-1μg pCMV-N-BFP (蓝色荧光蛋白) 1μg
D2701-100μg pCMV-N-BFP (蓝色荧光蛋白) 100μg
D2703-1μg pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) 1μg
D2703-100μg pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) 100μg
D2705-1μg pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 1μg
D2705-100μg pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 100μg
D2707-1μg pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) 1μg
D2707-100μg pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) 100μg
D2711-1μg pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) 1μg
D2711-100μg pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) 100μg
D2716-1μg pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) 1μg
D2716-100μg pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) 100μg
D2722-1μg pCMV-N-Flag 1μg
D2722-100μg pCMV-N-Flag 100μg
D2733-1μg pCMV-N-HA 1μg
D2733-100μg pCMV-N-HA 100μg
D2737-1μg pCMV-N-His 1μg
D2737-100μg pCMV-N-His 100μg
D2756-1μg pCMV-N-Myc 1μg
D2756-100μg pCMV-N-Myc 100μg
D2815-1μg pCMV-GFP-LC3B 1μg
D2815-100μg pCMV-GFP-LC3B 100μg
D2816-1μg pCMV-mCherry-GFP-LC3B 1μg
D2816-100μg pCMV-mCherry-GFP-LC3B 100μg
D2817-1μg pCMV-GFP-p62 1μg
D2817-100μg pCMV-GFP-p62 100μg
D2818-1μg pCMV-mCherry-p62 1μg
D2818-100μg pCMV-mCherry-p62 100μg


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