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pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白)
产品编号: D2707-100μg
产品包装: 100μg
产品价格: 1086.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2707-100μg pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) 100μg 1086.00元

      pCMV-N-EGFP是碧云天自行研发的哺乳动物细胞表达质粒,用于表达N端含EGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein, 增强绿色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子,可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的前面有一个EGFP的完整编码序列,因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达N端含有EGFP标签的融合蛋白。利用EGFP的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位,也可以利用EGFP抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可以使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
      pCMV-N-EGFP质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
EGFP 677-1393
Multiple cloning site 1394-1483
T7 promoter and T7 primer binding site 1503-1524
SV40 polyA signal 1536-1919
f1 origin of ss-DNA replication 2057-2363
bla promoter 2388-2512
SV40 promoter 2532-2870
Neomycin/kanamycin resistance ORF 205-3696
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3697-4155
pUC origin 4284-4951

       pCMV-N-EGFP质粒(5003bp)的图谱如下:

      pCMV-Blank的多克隆位点的详细图谱如下:

SacI EGFP
651 GAGCTCTAGC GCTACCGGTC
GCCACC ATGG
TGAGCAAGGG
CGAGGAGCTG
CTCGAGATCG CGATGGCCAG
CGGTGG TACC
ACTCGTTCCC
GCTCCTCGAC
701 TTCACCGGGG TGGTGCCCAT CCTGGTCGAG CTGGACGGCG
ACGTAAACGG
AAGTGGCCCC ACCACGGGTA GGACCAGCTC GACCTGCCGC
TGCATTTGCC
751 CCACAAGTTC AGCGTGTCCG GCGAGGGCGA GGGCGATGCC
ACCTACGGCA
GGTGTTCAAG TCGCACAGGC CGCTCCCGCT CCCGCTACGG
TGGATGCCGT
801 AGCTGACCCT GAAGTTCATC TGCACCACCG GCAAGCTGCC
CGTGCCCTGG
TCGACTGGGA CTTCAAGTAG ACGTGGTGGC CGTTCGACGG
GCACGGGACC
851 CCCACCCTCG TGACCACCCT GACCTACGGC GTGCAGTGCT
TCAGCCGCTA
GGGTGGGAGC ACTGGTGGGA CTGGATGCCG CACGTCACGA
AGTCGGCGAT
901 CCCCGACCAC ATGAAGCAGC ACGACTTCTT CAAGTCCGCC
ATGCCCGAAG
GGGGCTGGTG TACTTCGTCG TGCTGAAGAA GTTCAGGCGG
TACGGGCTTC
951 GCTACGTCCA GGAGCGCACC ATCTTCTTCA AGGACGACGG
CAACTACAAG
CGATGCAGGT CCTCGCGTGG TAGAAGAAGT TCCTGCTGCC
GTTGATGTTC
1001 ACCCGCGCCG AGGTGAAGTT CGAGGGCGAC ACCCTGGTGA
ACCGCATCGA
TGGGCGCGGC TCCACTTCAA GCTCCCGCTG TGGGACCACT
TGGCGTAGCT
1051 GCTGAAGGGC ATCGACTTCA AGGAGGACGG CAACATCCTG
GGGCACAAGC
CGACTTCCCG TAGCTGAAGT TCCTCCTGCC GTTGTAGGAC
CCCGTGTTCG
1101 TGGAGTACAA CTACAACAGC CACAACGTCT ATATCATGGC
CGACAAGCAG
ACCTCATGTT GATGTTGTCG GTGTTGCAGA TATAGTACCG
GCTGTTCGTC
1151 AAGAACGGCA TCAAGGTGAA CTTCAAGATC CGCCACAACA
TCGAGGACGG
TTCTTGCCGT AGTTCCACTT GAAGTTCTAG GCGGTGTTGT
AGCTCCTGCC
1201 CAGCGTGCAG CTCGCCGACC ACTACCAGCA GAACACCCCC
ATCGGCGACG
GTCGCACGTC GAGCGGCTGG TGATGGTCGT CTTGTGGGGG
TAGCCGCTGC
1251 GCCCCGTGCT GCTGCCCGAC AACCACTACC TGAGCACCCA
GTCCGCCCTG
CGGGGCACGA CGACGGGCTG TTGGTGATGG ACTCGTGGGT
CAGGCGGGAC
1301 AGCAAAGACC CCAACGAGAA GCGCGATCAC ATGGTCCTGC
TGGAGTTCGT
TCGTTTCTGG GGTTGCTCTT CGCGCTAGTG TACCAGGACG
ACCTCAAGCA
BamHI HindIII
1351 GACCGCCGCC GGGATCACTC TCGGCATGGA CGAGCTGTAC
AAG GGATCCA
CTGGCGGCGG CCCTAGTGAG AGCCGTACCT GCTCGACATG
TTC CCTAGGT
PstIEcoRIEcoRV SalIBglII XhoIXbaISpeI
1401 AGCTTCTGCA GGAATTCGAT ATCGTCGACA GATCTCTCGA GTCTAGAACT
TCGAAGACGT CCTTAAGCTA TAGCAGCTGT CTAGAGAGCT CAGATCTTGA
ApaI
1451 AGTGGGCCCG GTACCTTAAT TAATTAAGGT ACC
TCACCCGGGC CATGGAATTA ATTAATTCCA TGG

      pCMV-N-EGFP中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-EGFP)包括:

AclI AflII AhdI AscI AsiSI BaeI BbsI
BbvCI BlpI BmgBI BsiWI BsmBI BspEI BspQI
BssHII BstEII BstXI BstZ17I EarI EcoNI FseI
NotI NruI PflMI PmeI PmlI PpuMI PshAI
PspXI SacII SapI SbfI ScaI SgrAI SmaI
SwaI TspMI XcmI XmaI XmnI

      pCMV-Blank中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-Blank once)包括:

NdeI CA`TA,TG 240 ApaI G,GGCC`C 1454
SnaBI TAC|GTA 346 PvuI CG,AT`CG 1534
CspCI ,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN` 380 BclI T`GATC,A 1690
NheI G`CTAG,C 597 MfeI C`AATT,G 1783
BmtI G,CTAG`C 597 HpaI GTT|AAC 1796
Eco53kI GAG|CTC 653 MluI A`CGCG,T 1919
SacI G,AGCT`C 651 BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 2080
AfeI AGC|GCT 660 DraIII CAC,NNN`GTG 2146
AgeI A`CCGG,T 664 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 2805
BcgI ,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN` 765 StuI AGG|CCT 2854
BsrGI T`GTAC,A 1386 ClaI AT`CG,AT 2873
BamHI G`GATC,C 1394 BspDI AT`CG,AT 2873
HindIII A`AGCT,T 1400 EagI C`GGCC,G 2939
PstI C,TGCA`G 1406 KasI G`GCGC,C 3032
EcoRI G`AATT,C 1412 NarI GG`CG,CC 3033
EcoRV GAT|ATC 1420 SfoI GGC|GCC 3034
SalI G`TCGA,C 1424 PluTI G,GCGC`C 3032
AccI GT`MK,AC 1425 MscI TGG|CCA 3115
BglII A`GATC,T 1430 PflFI GACN`N,NGTC 3151
BsoBI C`YCGR,G 1436 Tth111I GACN`N,NGTC 3151
PaeR7I C`TCGA,G 1436 BsrDI GCAATG,NN` 3264
AvaI C`YCGR,G 1436 RsrII CG`GWC,CG 3549
XhoI C`TCGA,G 1436 BstBI TT`CG,AA 3715
XbaI T`CTAG,A 1442 BsaI GGTCTCN`NNNN, 4022
SpeI A`CTAG,T 1448 ApaLI G`TGCA,C 4637
PspOMI G`GGCC,C 1454 PciI A`CATG,T 4951

      pCMV-N-EGFP质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      N-EGFP primer (1284-1303): 5'-GCACCCAGTCCGCCCTGAGC-3'
      T7 primer (1503-1524): 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3'
      pCMV-N-EGFP的全序列信息:D2707 pCMV-N-EGFP-seq.txt
      pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果请参考图1。

图1. pCMV-N-EGFP质粒转染细胞后的表达效果图。左侧为明场照片,右侧为荧光照片。

包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2707-1μg pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) 1μg
D2707-100μg pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) 100μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl, 共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pCMV-N-EGFP质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,构建的质粒可以用常规方法转染细胞。
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产品编号 产品名称 包装
D2602-1μg pCMV-Blank 1μg
D2602-100μg pCMV-Blank 100μg
D2621-1μg pCMV-C-BFP (蓝色荧光蛋白) 1μg
D2621-100μg pCMV-C-BFP (蓝色荧光蛋白) 100μg
D2623-1μg pCMV-C-CFP (青色荧光蛋白) 1μg
D2623-100μg pCMV-C-CFP (青色荧光蛋白) 100μg
D2624-1μg pCMV-C-DsRed (红色荧光蛋白) 1μg
D2624-100μg pCMV-C-DsRed (红色荧光蛋白) 100μg
D2626-1μg pCMV-C-EGFP (绿色荧光蛋白) 1μg
D2626-100μg pCMV-C-EGFP (绿色荧光蛋白) 100μg
D2628-1μg pCMV-C-mCherry (红色荧光蛋白) 1μg
D2628-100μg pCMV-C-mCherry (红色荧光蛋白) 100μg
D2630-1μg pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) 1μg
D2630-100μg pCMV-C-YFP (黄色荧光蛋白) 100μg
D2632-1μg pCMV-C-Flag 1μg
D2632-100μg pCMV-C-Flag 100μg
D2639-1μg pCMV-C-HA 1μg
D2639-100μg pCMV-C-HA 100μg
D2650-1μg pCMV-C-His 1μg
D2650-100μg pCMV-C-His 100μg
D2672-1μg pCMV-C-Myc 1μg
D2672-100μg pCMV-C-Myc 100μg
D2701-1μg pCMV-N-BFP (蓝色荧光蛋白) 1μg
D2701-100μg pCMV-N-BFP (蓝色荧光蛋白) 100μg
D2703-1μg pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) 1μg
D2703-100μg pCMV-N-CFP (青色荧光蛋白) 100μg
D2705-1μg pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 1μg
D2705-100μg pCMV-N-DsRed (红色荧光蛋白) 100μg
D2707-1μg pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) 1μg
D2707-100μg pCMV-N-EGFP (绿色荧光蛋白) 100μg
D2711-1μg pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) 1μg
D2711-100μg pCMV-N-mCherry (红色荧光蛋白) 100μg
D2716-1μg pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) 1μg
D2716-100μg pCMV-N-YFP (黄色荧光蛋白) 100μg
D2722-1μg pCMV-N-Flag 1μg
D2722-100μg pCMV-N-Flag 100μg
D2733-1μg pCMV-N-HA 1μg
D2733-100μg pCMV-N-HA 100μg
D2737-1μg pCMV-N-His 1μg
D2737-100μg pCMV-N-His 100μg
D2756-1μg pCMV-N-Myc 1μg
D2756-100μg pCMV-N-Myc 100μg


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