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核酸相关> 菌种与质粒> 真核载体
pCMV-C-HA
产品编号: D2639-1μg
产品包装: 1μg
产品价格: 888.00元
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2639-1μg pCMV-C-HA 1μg 888.00元

pCMV-C-HA是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端与HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达;在多克隆位点的3'端含有一个可以编码HA标签的序列,因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白,可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白,有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后,可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。
pCMV-C-HA质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
CMV promoter 1-602
T3 promoter and T3 primer binding site 620-639
multiple cloning site 680-740
c-HA tag 741-767
T7 promoter and T7 primer binding site 820-841
SV40 polyA signal 853-1236
f1 origin of ss-DNA replication 1374-1678
bla promoter 1703-1827
SV40 promoter 1847-2185
neomycin/kanamycin resistance ORF 2220-3011
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3012-3470
pUC origin 3599-4266

pCMV-C-HA质粒的图谱如下:

pCMV-C-HA的多克隆位点的详细图谱如下:

XmaIPstI
SacI Small BamHI HindIII
651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCT
CTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGA
HA
EcoRIEcoRVSalI BglII XhoI XbaI
Y P Y D
701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA
TACCCATACG
CGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT
ATGGGTATGC
tag
V P D Y A ApaII
751 ATGTTCCAGA
TTACGCT TAA
GGGCCCGGTA CCTTAATTAA TTAAGGTACC
TACAAGGTCT
AATGCGA
ATT
CCCGGGCCAT GGAATTAATT AATTCCATGG

pCMV-C-HA中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-HA)包括:

Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp I Bsg I
BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 I BstE II
Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse I Nru I
PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap I Sca I
Spe I Spl I

pCMV-C-HA中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-HA once)包括:

Nde I CA`TA,TG 241 Pvu I CG,AT`CG 854
SnaB I TAC|GTA 347 Bcl I T`GATC,A 1008
Nhe I G`CTAG,C 598 Mun I C`AATT,G 1101
Sac I G,AGCT`C 656 Hpa I GTT|AAC 1114
Sac II CC,GC`GG 663 Mlu I A`CGCG,T 1237
BstX I CCAN,NNNN`NTGG 664 Dra III CAC,NNN`GTG 1467
Not I GC`GGCC,GC 669 Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 2124
PspA I C`CCGG,G 681 BseR I GAGGAG 16/14 2167
Xma I C`CCGG,G 681 Stu I AGG|CCT 2170
Srf I GCCC|GGGC 683 Cla I AT`CG,AT 2189
Sma I CCC|GGG 683 Kas I G`GCGC,C 2348
BamH I G`GATC,C 688 Nar I GG`CG,CC 2349
Hind III A`AGCT,T 694 Ehe I GGC|GCC 2350
Pst I C,TGCA`G 704 Bbe I G,GCGC`C 2352
EcoR I G`AATT,C 706 Msc I TGG|CCA 2431
EcoR V GAT|ATC 714 Tth111 I GACN`N,NGTC 2467
Sal I G`TCGA,C 718 BsrD I GCAATG, 8 2582
Acc I GT`MK,AC 719 Bsp1286 I G,DGCH`C 2652
Bgl II A`GATC,T 724 Rsr II CG`GWC,CG 2865
PaeR7 I C`TCGA,G 730 BsiC I TT`CG,AA 3031
Xho I C`TCGA,G 730 BstB I TT`CG,AA 3031
Xba I T`CTAG,A 736 Bsa I GGTCTC 7/11 3338
Afl II C`TTAA,G 767 HgiE II ACCNNNNNNGGT-1/13 3678
Bsp120 I G`GGCC,C 772 ApaL I G`TGCA,C 3953
Apa I G,GGCC`C 776

pCMV-C-HA质粒中对于插入片段进行测序时,推荐使用的正向测序引物T3和反向测序引物T7的序列如下:
T3 primer(620-639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′
T7 primer(820-841): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′
pCMV-C-HA的全序列信息: D2639 pCMV-C-HA-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2639-1μg pCMV-C-HA 1μg
D2639-100μg pCMV-C-HA 100μg
说明书 1份

保存条件:
-20℃保存。
注意事项:
本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用1μg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3. pCMV-C-HA质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因,需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致,即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

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使用本产品的文献:
1. Xing J, Wang S, Lin R, Mossman KL, Zheng C.
J Virol . 2012 Apr;86(7):3528-40. (IF 4.324)
3. Cai M, Li M, Wang K, Wang S, Lu Q, Yan J, Mossman KL, Lin R, Zheng C.
PLoS One . 2013;8(1):e54586. (IF 2.776)
4. Qiu Y, Ding Y, Zou L, Tan Z, Liu T, Fu X, Xu W.
PLoS One . 2013 Apr 23;8(4):e61508. (IF 2.776)
6. Cui J, Duan B, Zhao X, Chen Y, Sun S, Deng W, Zhang Y, Du J, Chen Y, Gu L.
TUMOR BIOL  . 2016 Oct;37(10):13455-67. (IF 3.65)
7. Duan B, Cui J, Sun S, Zheng J, Zhang Y, Ye B, Chen Y, Deng W, Du J, Zhu Y, Chen Y, Gu L.
Cancer Lett . 2016 Aug 28;379(1):70-83. (IF 6.508)
8. Deng W, Wang Y, Gu L, Duan B, Cui J, Zhang Y, Chen Y, Sun S, Dong J, Du J.
BMC Cancer . 2016 Jul 18;16:489. (IF 2.933)
9. Deng W, Gu L, Li X, Zheng J, Zhang Y, Duan B, Cui J, Dong J, Du J.
J Transl Med . 2016 Feb 1;14:32. (IF 4.098)
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