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核酸相关> 菌种与质粒> 报告基因质粒
pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒)
产品编号: D2225-100μg
产品包装:100μg
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价格: ¥ 1169.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D2225-1μg pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1μg 888.00元
D2225-100μg pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 100μg 1169.00元

pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于检测p53转录活性水平的报告基因质粒。pp53-TA-GLuc-Dura是以碧云天的pGLuc-Dura-TA质粒为模板,在其多克隆位点插入了多个p53结合位点,可以高灵敏度地检测p53的激活水平。

pGLuc-Dura-TA (报告基因质粒)是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中进行分泌型、高稳定性、非ATP依赖的Gaussia-Dura Luciferase (Gluc-Dura)萤光素酶报告基因检测的新一代质粒,该报告基因质粒在pGL6-TA (D2105)的基础上进行了改造,用了蛋白表达水平更高、萤光更稳定的突变型(mutant, Mut)的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因对原firefly luciferase进行了替换。同时该质粒也延续了pGL6-TA的优势,即与Promega pGL3系列质粒相比,对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理,在保持原有功能不变的情况下,使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到最低。

Gaussia Luciferase是分离于夏威夷水域的一种大型海洋桡脚类(Copepod)动物(Gaussia princeps)的新型萤光素酶。Gaussia Luciferase为单条肽链的单体酶,其分子量较小(20kD),且具有分泌性信号肽,可通过内质网分泌到细胞外。因此在使用Gaussia Luciferase的报告基因载体转染哺乳动物细胞进行表达时,无需裂解细胞,可直接使用细胞培养基上清进行萤光素酶活性的实时检测(当然也可以进行细胞裂解以分析细胞裂解中的萤光素酶活性)。

Gaussia Luciferase萤光素酶催化底物腔肠素的氧化反应并且发光(480nm)。与其他萤光素酶相比,使用Gaussia Luciferase作为报告基因有更多的优势:分泌型萤光素酶,可直接取上清检测,无须裂解细胞;发光强度高,是其它萤光素酶的1000倍;反应无须ATP,不受ATP影响;稳定性高,对温度、pH值等耐受性强。

与野生型Gaussia Luciferase相比,突变型Gaussia-Dura Luciferase在哺乳动物细胞中进行表达时,不仅保留了Gaussia Luciferase的优势和特点,还具有更高的蛋白表达水平和更好的萤光稳定性。

萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。

pp53-TA-GLuc-Dura质粒的主要信息如下:

Feature Nucleotide Position
p53 response element 20-73
Minimal TA promoter (pTA) 96-118
GLuc (MT) reporter gene 160-717
SV40 late poly (A) signal 752-973
SV40 early enhancer/promoter 1021-1439
Synthetic neomycin phosphotransferase (Neor) coding region 1464-2258
Synthetic poly (A) signal 2283-2331
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region 2398-2417
ColE1-derived plasmid replication origin 2655
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region 3446-4306
Synthetic poly (A) signal/transcriptional pause site 4411-4564
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region 4513-4532

pp53-TA-GLuc-Dura质粒(4564bp)的图谱如下:

pp53-TA-GLuc-Dura的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2225 pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒).pdf

pp53-TA-GLuc-Dura中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pp53-TA-GLuc-Dura)包括:

AatII AclI AflII AscI AseI AsiSI BmgBI
BmtI BsaAI BsaI BsiWI BspEI BsrGI BssHII
CspCI DraIII Eco53kI EcoRI EcoRV MluI NdeI
NheI PacI PaeR7I PflFI PflMI PmeI PmlI
PspXI RsrII SacI SbfI SnaBI SwaI Tth111I
XcmI XhoI ZraI

pp53-TA-GLuc-Dura中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pp53-TA-GLuc-Dura)包括:

Acc65I G`GTAC,C 14 BstZ17I GTA|TAC 4029
AflIII A`CRYG,T 2597 Bsu36I CC`TNAGG 3875
AgeI A`CCGG,T 2268 EcoNI CCTNN`N,NNAGG 1938
AleI CACNN|NNGTG 3439 Esp3I CGTCTCN`NNNN, 4361
ApaI G,GGCC`C 1534 FspI TGC|GCA 1022
ApoI R`AATT,Y 827 HindIII A`AGCT,T 85
AvaI C`YCGR,G 63 HpaI GTT|AAC 882
BaeI ,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5` 1664 KpnI G,GTAC`C 19
BamHI G`GATC,C 984 MfeI C`AATT,G 891
BbvCI CC`TCA,GC 2149 NotI GC`GGCC,GC 3417
BciVI GTATCC(N)5,N` 2799 NruI TCG|CGA 265
BcoDI GTCTCN`NNNN, 4361 PciI A`CATG,T 2597
BglI GCCN,NNN`NGGC 9 PsiI TTA|TAA 862
BglII A`GATC,T 75 PspOMI G`GGCC,C 1534
BpmI CTGGAG(N)14,NN` 338 PvuII CAG|CTG 1094
BsaXI ,NNN`(N)9AC(N)5CTCC(N)7,NNN` 155 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 5
BsmAI GTCTCN`NNNN, 4361 SgrAI CR`CCGG,YG 1680
BsmBI CGTCTCN`NNNN, 4361 SmaI CCC|GGG 65
BsoBI C`YCGR,G 63 SpeI A`CTAG,T 4348
BspHI T`CATG,A 3317 SrfI GCCC|GGGC 65
BssSI C`ACGA,G 2770 StuI AGG|CCT 1417
BstBI TT`CG,AA 2333 TspMI C`CCGG,G 63
BstEII G`GTNAC,C 3444 XmaI C`CCGG,G 63
BstXI CCAN,NNNN`NTGG 3437 XmnI GAANN|NNTTC 421

pp53-TA-GLuc-Dura质粒可使用的测序引物序列如下:

RVprimer3 (4513-4532): CTA GCA AAA TAG GCT GTC CC

pp53-TA-GLuc-Dura的全序列信息:D2225 pp53-TA-GLuc-Dura(报告基因质粒).txt

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D2225-1µg pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 1μg
D2225-100µg pp53-TA-GLuc-Dura (报告基因质粒) 100μg
说明书 1份
保存条件:

-20℃保存。

注意事项:

本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.首次使用1µg包装的本产品时,请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2.100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl,共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。
3.pp53-TA-GLuc-Dura可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用碧云天的Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶报告基因检测试剂盒检测Gaussia-Dura Luciferase萤光素酶的表达水平。
4.紫外照射、离子辐射等可以导致DNA损伤的作用或试剂可以激活p53,可以用作pp53-TA-GLuc-Dura报告基因检测时的阳性对照。
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