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pGL6-miR (报告基因质粒)
产品编号: D2106-1μg
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D2106-1μg pGL6-miR (报告基因质粒) 1μg 888.00元
D2106-100μg pGL6-miR (报告基因质粒) 100μg 1129.00元

      pGL6-miR (报告基因质粒)是碧云天自行研发的一种用于microRNA(miRNA)等研究的萤光素酶报告基因质粒。该质粒可用于把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到其多克隆位点,然后在哺乳动物细胞中高灵敏度地检测特定microRNA(miRNA)或其它非编码RNA等对该基因3'-UTR或其它靶序列调控活性的报告基因质粒。
      萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶和海肾萤光素酶也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶。
      pGL6-miR以碧云天的pGL6质粒为模板,具有氨苄青霉素抗性,并在萤火虫萤光素酶基因之后添加了多克隆位点,便于插入目的基因的3'-UTR或其它适当的靶序列。
      pGL6-miR的主要工作原理是,把目的基因的3'非翻译区(3'-untranslated region, 3'-UTR)或其它适当序列插入到萤光素酶基因(luc2)的下游,转染细胞并检测萤光素酶的表达。如果细胞内源或外源表达的miRNA与靶序列结合,通常会抑制萤光素酶的翻译或促进mRNA的降解,从而使萤光素酶的表达量减少。因此通过本报告基因质粒检测萤光素酶的表达水平,可以检测内源或外源表达的miRNA是否对插入的靶序列有调控作用。并且可以通过靶序列中预测的miRNA结合位点的突变,用于比较突变前后萤光素酶表达水平的变化。如果预测的miRNA位点突变后,miRNA的调控作用消失,则基本上说明突变的位点就是miRNA在靶序列中具体的结合位点。
      pGL6-miR带有中低等强度的PGK启动子,有利于检测miRNA等对于萤火虫萤光素酶表达水平的下调作用,即当miRNA的抑制作用较弱时也能检测到。并且PGK启动子可以在人、大鼠、小鼠甚至酵母细胞中都可以发挥作用。
      pGL6-miR质粒的主要信息如下:

Base pairs 6097bp
Feature Nucleotide Position
PGK promoter 20-538
luc2 reporter gene 549-2202
Multiple cloning region 2208-2261
SV40 late poly(A) sinal 2268-2512
SV40 early enhancer/promoter 2554-2972
Synthetic neomycin phosphotransferase(Neor)coding region 2998-3792
Synthetic poly(A) signal 3817-3865
Synthetic Beta-lactamase(Ampr) coding region 4980-5840
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site 5945-6097

      pGL6-miR质粒图谱如下:

      pGL6-miR质粒的多克隆位点的详细图谱见说明书:https://www.beyotime.com/Manual/D2106 pGL6-miR (报告基因质粒).pdf

      pGL6-miR中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pGL6-miR)包括:

Aat II Afl II Asc I Ase I Bsa I BsaA I BsiW I
BssH II Eco72 I EcoR I Nde I Nru I PflM I Pme I
Pml I Psp1406 I PspA I Rsr II Sam I SnaB I Spl I
Srf I Tth111 I Vsp I Xcm I

      pGL6-miR中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pGL6-miR once)包括:

Sfi I GGCCN,NNN`NGGCC 9 Sal I G`TCGA,C 3881
BspM II T`CCGG,A 445 EcoN I CCTNN`N,NNAGG 3472
BsaB I GATNN|NNATC 997 Xba I T`CTAG,A 3796
BsrG I T`GTAC,A 1040 BsiC I TT`CG,AA 3867
Dra III CAC,NNN`GTG 1696 BstB I TT`CG,AA 3867
Acc65 I G`GTAC,C 2209 ApaL I G`TGCA,C 4445
Asp718 G`GTAC,C 2209 Ple I GAGTC 9/10 4510
Kpn I G,GTAC`C 2213 HgiE II ACCNNNNNNGGT -1/13 4710
BamH I G`GATC,C 2221 Not I GC`GGCC,GC 4951
EcoR V GAT|ATC 2229 BstX I CCAN,NNNN`NTGG 4975
PaeR7 I C`TCGA,G 2233 Pst I C,TGCA`G 4975
Xho I C`TCGA,G 2233 BstE II G`GTNAC,C 4978
Sac I G,AGCT`C 243 Ahd I GACNN,N`NNGTC 5053
Mlu I A`CGCG,T 2245 Bsu36 I CC`TNA,GG 5409
Bgl II A`GATC,T 2251 Pvu I CG,AT`CG 5423
HinD III A`AGCT,T 2257 Sac II CC,GC`GG 5447
Apo I R`AATT,Y 2361 Bst1107 I GTA|TAC 5563
Mun I C`AATT,G 2425 Xca I GTA|TAC 5563

      pGL6-miR质粒中推荐使用的测序引物序列如下:
      Forward primer (2135-2154): 5′GTTGGACGCCCGCAAGATCC 3′
      Reverse primer (2303-2322): 5′GGTTTGTCCAAACTCATCAA 3′
      pGL6-miR的全序列信息:D2106 pGL6-miR-seq.txt
包装清单:

产品编号 产品名称 包装
D2106 pGL6-miR (报告基因质粒) 1μg
说明书 1份

保存条件:
      -20℃保存。
注意事项:
      本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌,进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽
提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定,或通过测序进行鉴定。
2. 插入靶序列:在pGL6-miR多克隆位点选取适当的酶切位点,经酶切处理后连入目的基因的3'-UTR或
其它适当的靶序列。
3. 以此质粒为模板构建的质粒可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可以采用碧云天的萤火虫萤
光素酶报告基因检测试剂盒(RG016/RG017)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒(RG027/RG028)。
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使用本产品的文献:
1. Gao M, Li C, Xu M, Liu Y, Liu S.
Toxicol Lett . 2018 Mar 1;284:195-204. (IF 3.569)
3. Yang K,Shi J,Hu Z,Hu X
Clin Sci (Lond). 2019 Sep 10;133(17):1845-1856.
4. Liu Y,Chen G,Liu H,Li Z,Yang Q,Gu X,Du Z,Zhang G,Wang J
Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2019 Dec;47(1):2114-2122.
5. Lu K,Feng F,Yang Y,Liu K,Duan J,Liu H,Yang J,Wu M,Liu C,Chang Y
J Gastroenterol. 2020 Jan;55(1):51-66. (IF 6.132)
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