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核酸相关> 菌种与质粒> 感受态及制备
DH5α超级感受态细胞
产品编号: D1031S
产品包装:20×100μl
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价格: ¥ 258.00
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产品编号 产品名称 产品包装 产品价格
D1031S DH5α超级感受态细胞 20×100μl 258.00元
D1031M DH5α超级感受态细胞 100×100μl 1058.00元

碧云天生产的DH5α超级感受态细胞,英文名DH5α Super Competent Cells,是一种可以用于常规质粒高效转化的质粒克隆用E. coli DH5α即用型化学感受态细胞。使用pUC19质粒进行热激活转化,转化效率可以高达1×109 cfu/μg DNA以上。

DH5α是实验室最为常用的大肠杆菌菌株之一,广泛用于基因克隆,蓝白筛选,质粒稳定扩增等分子生物学实验。

DH5α菌株的基因型为F- φ80 lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA, supE44 thi-1 gyrA96 relA1 λ-,该菌株缺失核酸内切酶(endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型(recA) 减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;lacZΔM15的表达使DH5α感受态可用于蓝、白斑筛选[1,2]。

包装清单:
产品编号 产品名称 包装
D1031S DH5α超级感受态细胞 20×100μl
D1031M DH5α超级感受态细胞 100×100μl
说明书 1份
保存条件:

-80℃保存,一年内有效。避免反复冻融,通常制备6个月后转化效率随保存时间延长而逐渐降低。

注意事项:

感受态细胞禁止反复冻融,并应尽可能避免冻融,反复冻融会导致转化效率大幅下降。

感受态细胞融化后,须尽快加入待转化样品,不宜在无转化产物的情况下放置时间超过10分钟或以上时间,以免降低感受态细胞的转化效率。

待转化样品的体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,样品体积过大会导致转化效率下降。

感受态细胞对于温度变化非常敏感,需要避免出现不应有的使用说明之外的温度变化。

感受态细胞对于机械力非常敏感。加入待转化样品时应轻柔操作,不能使用移液枪吹打混匀。

通常仅建议取部分样品用于转化,这样万一遇到转化失败的情况,还留有样品可以再次进行转化。

本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明:
1.解冻感受态细胞。取感受态细胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分钟以上的时间。解冻后须尽量在10分钟内使用,放置时间过长会影响转化效率。
2.DNA样品的转化。取一管感受态细胞,加入DNA样品,例如质粒、连接产物或重组产物等,轻轻弹击管底约2-3次或轻轻晃动约2-3次以混匀,立即冰浴静置30min注意:所用DNA体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%,混合时不得使用移液器进行吹打。如果用于质粒的转化扩增,冰浴静置约10分钟,后续可以直接涂板并培养过夜;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议冰浴静置30min并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤,以提高转化效率。
3.热激处理。将冰浴放置的离心管快速置于42℃水浴中,静置热激45秒。随后立即转移至冰水浴中静置2分钟以快速冷却至接近零度。热激及转移至冰浴过程中切勿晃动离心管。
4.复苏培养。加入900μl不含抗生素的LB培养基,颠倒数次混匀, 37℃摇床约150rpm复苏培养1小时。如果用于质粒的转化扩增,复苏培养10-20分钟也完全足够了;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议严格进行复苏培养操作。
5.收菌涂板。约5000g室温离心1min,沉淀细菌,吸除约900-950μl上清,余下的约50-100μl上清。用移液器轻轻吹打并重悬菌体,随后涂布到含相应抗生素的LB平板上。注意:如果用于质粒的转化扩增,可以仅取少量进行涂板;如果用于连接产物或重组产物的转化,建议取所有重悬的菌液涂板。
6.将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
参考文献:
1.Meselson M, Yuan R. Nature. 1968 Mar 23;217(5134):1110-4.
2.Grant SG, Jessee J, Bloom FR, Hanahan D. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990 Jun;87(12):4645-9.
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